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小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 双酶切问题

今天第一次用EcoR1和Xho1做双酶切切质粒,37° 3h,师兄说差不多了,结果切出来,差很多,基本上算是没切动,大家一般做双酶切都是切多长时间啊,体系是怎样呢?
我今天做的1*H 2ul   EcoR1 1ul  Xho1  1ul 质粒 6ul  ddH2O 10ul
总体积20ul
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小白3521

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-11-2 22:02:

给你推荐个体系:
Buffer 2X Tango:4ul
             EcoR1 :1ul  
             Xho1  :1ul
                质粒:6ul(浓度较高的话)
                dd   :8ul
37℃,3h。如果只是酶切验证的话 ...

弱弱的问一下啊,“Buffer 2X Tango”是何物啊?就是这两个酶的通用缓冲液么?
我准备酶切回收的,那应该增大体系咯?
6楼2009-11-02 22:14:06
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whisht

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我做酶切时,用的是4小时多一些
2楼2009-11-02 21:22:23
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小白3521

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by whisht at 2009-11-2 21:22:
我做酶切时,用的是4小时多一些

那你一般加多少质粒呢
3楼2009-11-02 21:51:03
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迪亚格686

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
质粒浓度可能太高了,一般用一微克的质粒 用试剂盒提的质粒浓度在0.3微克/微升左右 你质粒量偏大了
4楼2009-11-02 22:01:52
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