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小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 双酶切问题

今天第一次用EcoR1和Xho1做双酶切切质粒,37° 3h,师兄说差不多了,结果切出来,差很多,基本上算是没切动,大家一般做双酶切都是切多长时间啊,体系是怎样呢?
我今天做的1*H 2ul   EcoR1 1ul  Xho1  1ul 质粒 6ul  ddH2O 10ul
总体积20ul
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


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引用回帖:
Originally posted by 小白3521 at 2009-11-2 22:14:

弱弱的问一下啊,“Buffer 2X Tango”是何物啊?就是这两个酶的通用缓冲液么?
我准备酶切回收的,那应该增大体系咯?

Tango这是个通用Buffer,一般为10X,即一般10ul体积加入1ul,用这两种酶进行双酶切,需要用2X的,是两种酶活均保持100%,即10ul体系加2ul。
8楼2009-11-02 22:18:00
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whisht

银虫 (小有名气)


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我做酶切时,用的是4小时多一些
2楼2009-11-02 21:22:23
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小白3521

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by whisht at 2009-11-2 21:22:
我做酶切时,用的是4小时多一些

那你一般加多少质粒呢
3楼2009-11-02 21:51:03
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迪亚格686

新虫 (初入文坛)


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质粒浓度可能太高了,一般用一微克的质粒 用试剂盒提的质粒浓度在0.3微克/微升左右 你质粒量偏大了
4楼2009-11-02 22:01:52
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