| 查看: 2886 | 回复: 9 | |||
[交流]
重组pPIC9K质粒构建及GS115酵母表达
|
|||
|
本人目前刚开始做毕赤酵母表达，实验室没有相关背景，很多地方不明白，希望各路大神指点 1、我已经构建好重组质粒，但是现在有点不确定构建是否有问题：我的目的基因插入在5‘aox1及a- factor后面，但是我把原本a- factor后面，taa之前，的30bp删去了，不知有没有影响 2、在线性化酶切时，酶切效率很低，50ul体系，其中dna 4ul（约4ug），酶1ul，37度酶切1h，用的是takara的快切酶，怎样能提高酶切效率呢，是需要加大酶量还是延长酶切时间？ 3、电转之后转化子特别少，电转参数3kv，6ms，请问怎么才能提高转化率？ 4、实验室摇床只能达到200rpm，手册上推荐220-250rpm，请问转速低会不会影响表达？ 5、摇瓶发酵阶段需不需要控制ph？我是初始ph为5.0，用的是bmmy培养基 6、我用的载体ppic9k按理说是分泌表达，但是我分析发酵上清，发现目的蛋白表达量特别低，之前用的是单拷贝菌株，会不会是因为这个呢？还是说有可能没有分泌出来，需要破胞分析一下？ 本人菜鸟阶段问题有点多，感谢各位赐教！！ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有281人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
-
MCC950：NLRP3炎症小体特异性抑制剂的科研应用与前景
已经有0人回复
-
康替唑胺研发17年：如何解决多重耐药菌感染难题
已经有0人回复
-
伊曲莫德（Etrasimod）从“肠道免疫失控”到精准靶向干预
已经有1人回复
-
西达本胺：创新HDAC抑制剂的抗肿瘤之路
已经有0人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
清华大学深圳国际研究生院周栋课题组博士研究生招聘
+1/187
-
南京大学 智能驱动与感知材料实验室 诚招推免硕生生/直博生/博士生/科研助理/博士后
+1/134
-
【原创正式公开】爻0理论：四版完整进化 · 精细结构常数纯拓扑推导 · 四次投稿记录
+1/91
-
江苏大学优青 胡兴好教授课题组博士后招聘
+1/80
-
广东工业大学自动化学院国家特聘专家苏春翌教授招收2026年博士后及硕博研究生（推免）
+1/80
-
新西兰奥克兰大学计算机CS招PhD及访问学者
+1/79
-
兰州新区化工产业招商引资
+1/73
-
真诚才是必杀技
+1/62
-
康复大学神经肌肉康复工程团队诚聘博士后/科研助理——多模态生理感知与智能穿戴方向
+1/36
-
湖南师范大学（211，双一流）-有机化学-申请审核制博士招生
+1/35
-
【博士招生】江西理工大学招收博士研究生
+1/31
-
【通知】北京信息科技大学仪器科学与光电工程学院招收博士研究生（2026）
+2/22
-
【20260528】湖南工业大学许利剑教授招收2026级生物医学工程博士研究生
+1/13
-
上海大学微电子学院杨军教授团队招聘带编专任教师
+1/13
-
未婚80后理工男_征珠三角如深圳或周边温柔贤惠孝勤女
+2/8
-
哈尔滨工业大学/院士团队招收 硕士、博士
+1/6
-
北理工国家杰青团队招博士后
+1/5
-
北理工国家杰青团队招博士后
+1/4
-
读博申请无机纳米材料方向
+1/3
-
上海交通大学海优建组招开山弟子
+1/1
7楼2024-09-06 10:01:58
8楼2024-09-07 10:21:02
10楼2025-01-13 14:36:22
简单回复
2024-09-05 21:16
回复
幸运蓝霉(金币+2): 谢谢参与
hyjcs3楼
2024-09-05 21:28
回复
幸运蓝霉(金币+2): 谢谢参与
嚄 发自小木虫Android客户端
2024-09-05 21:30
回复
XG-WUST5楼
2024-09-05 22:12
回复
幸运蓝霉(金币+2): 谢谢参与
up 发自小木虫IOS客户端
庚辰辛丑6楼
2024-09-06 06:30
回复
幸运蓝霉(金币+2): 谢谢参与
2024-11-20 16:18
回复