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双酶切求助！ 已有2人参与
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双酶切后载体条带很浅 实验内容是载体和插入片段同时酶切过夜，用的EcoRI和BamHI，片段和载体都是50体系，且都加了500ng,试过把载体加到1000ng，跑出来的条带是插入片段是亮的，载体条带很浅，几乎看不见，测了浓度是载体酶切后在1-2ng/ul,反复酶切过几次都是这种结果，片段是1500bp，载体是改造载体1.6kb求大佬解答！ 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2023-05-11 10:37:14
3楼2023-05-11 11:53:23
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其实我后面已经重转过了，结果也是差不多，就是感觉载体有问题，但不知道问题在哪儿，后续用酶切产物直接回收，没有跑胶，得到过7-8ng/ul的浓度做了转化，但没有得到阳性菌 发自小木虫Android客户端 |
4楼2023-05-11 16:25:39
5楼2023-05-11 16:27:09
6楼2023-05-11 19:20:49
7楼2023-05-11 19:21:35
8楼2023-05-11 19:45:27
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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懂了，你是把载体酶切之后又用琼脂糖凝胶电泳观察到条带几乎不可见是吧，那这就要考虑是不是你酶切时间太久了，导致限制酶乱切，试试减少酶切时间，或换个公司的酶，按理说现在市面上的酶已经很少需要酶切过夜的了 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2023-05-12 12:39:05
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我也有过怀疑是否是酶切时间过长，同时也怀疑是否产生星号活性，昨晚换了ecroi的buffer，同样也未改善多少，接下来试一下缩短酶切时间吧，那我大概酶切多长时间呢，用的是赛默飞的酶，推荐时间是1-16小时 发自小木虫Android客户端 |
10楼2023-05-12 14:58:25