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C12ire1

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[求助] 双酶切求助！已有2人参与

双酶切后载体条带很浅

实验内容是载体和插入片段同时酶切过夜，用的EcoRI和BamHI，片段和载体都是50体系，且都加了500ng,试过把载体加到1000ng，跑出来的条带是插入片段是亮的，载体条带很浅，几乎看不见，测了浓度是载体酶切后在1-2ng/ul,反复酶切过几次都是这种结果，片段是1500bp，载体是改造载体1.6kb求大佬解答！

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1楼 2023-05-11 08:51:33

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引用回帖:

2楼: Originally posted by KM石头 at 2023-05-11 10:37:14
就实验描述来说，应该是质粒本身出了问题，载体在，酶切前有没有重新测一下浓度，看是否降解；如果正常的话，建议重新提取载体质粒，最后洗脱时，用水洗脱，同时注意260/230的比值，低于2.0的话，有机杂质的污染可能 ...

其实我后面已经重转过了，结果也是差不多，就是感觉载体有问题，但不知道问题在哪儿，后续用酶切产物直接回收，没有跑胶，得到过7-8ng/ul的浓度做了转化，但没有得到阳性菌

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