| 查看: 898 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
caiqingchong木虫 (著名写手)
|
[交流]
关于基因敲除时敲除菌株的筛选问题
|
||
|
现在用PSUP自杀质粒构建自杀载体后（目的基因内部插入了卡那基因），转到目的菌株内，长出了一片菌落，然后挑取单菌落，分别点到含链霉素+氯霉素平板和链霉素+卡那霉素平板上，野生菌株抗链霉素。 理论上敲除了目的基因的菌株应该是在链霉素+卡那霉素平板上生长但在链霉素+氯霉素平板上不长的，但筛选了几百个菌落，在两个平板上都生长，这是不是说明没有能够敲除啊，如何筛选才能更快的筛除来敲除菌株呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
297，工科调剂?河南农业大学本科
已经有4人回复
-
245求调剂
已经有10人回复
-
生物学调剂
已经有6人回复
-
人工智能320调剂08工类还有机会吗
已经有19人回复
-
105500药学求调剂
已经有3人回复
-
274求调剂
已经有9人回复
-
食品与营养（0955）271求调剂
已经有13人回复
-
转长聘了
已经有5人回复
-
药学305求调剂
已经有4人回复
-
26药学专硕105500求调剂
已经有5人回复
caiqingchong
木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2476.6
- 散金: 15
- 红花: 7
- 帖子: 1793
- 在线: 288.5小时
- 虫号: 264514
- 注册: 2006-07-08
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
2楼2009-09-22 08:22:50
caiqingchong
木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2476.6
- 散金: 15
- 红花: 7
- 帖子: 1793
- 在线: 288.5小时
- 虫号: 264514
- 注册: 2006-07-08
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
3楼2009-09-23 22:54:24
zhouzhou_3006
木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2752.3
- 散金: 1026
- 红花: 6
- 帖子: 1422
- 在线: 956小时
- 虫号: 465454
- 注册: 2007-11-22
4楼2009-09-23 23:59:55
5楼2009-09-24 00:59:28
caiqingchong
木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2476.6
- 散金: 15
- 红花: 7
- 帖子: 1793
- 在线: 288.5小时
- 虫号: 264514
- 注册: 2006-07-08
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
6楼2009-09-25 18:46:54
zhuifeng7000
至尊木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 16102
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 1919
- 在线: 87.7小时
- 虫号: 598143
- 注册: 2008-09-10
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2009-09-25 20:07:18
經天
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.001
- 金币: 9077.5
- 散金: 992
- 红花: 20
- 帖子: 2562
- 在线: 567.3小时
- 虫号: 269000
- 注册: 2006-07-30
- 性别: GG
- 专业: 农业昆虫学
8楼2009-09-25 21:18:20
caiqingchong
木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2476.6
- 散金: 15
- 红花: 7
- 帖子: 1793
- 在线: 288.5小时
- 虫号: 264514
- 注册: 2006-07-08
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
|
經天 ，你好。我的原始菌是绝对没有卡那抗性的。 我现在搞不懂的是，PSUP这个质粒能在我的菌里复制多久就可以自行消失（别人用过这个质粒敲除，所以用这个自杀质粒没问题）。从我的结果上看，当我转化后长出来一些菌落，这确定是质粒已经转到野生菌里了，但在氯霉素（psup自带抗性）平板上也长的很好，说明这个质粒还存在于菌株中，没有自杀掉。 这里还是关键是如何筛选的问题，我的这个筛选方法是没错的，把同一个单菌落分别接在链霉素+卡那霉素平板上和链霉素+氯霉素平板上。如果在前者长而在后者不长，说明卡那基因已经整合到基因组上了，而且自杀质粒已经消失了。 可我的菌在两种板上都长，这是怎么回事，还有别的筛选方法吗，有的人是随机挑取菌落提基因组，然后PCR扩增鉴定，这样是不是太没目的性了，而且几率不高啊！ 谢谢有经验的虫子来讨论！ |
9楼2009-09-26 08:56:20
caiqingchong
木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2476.6
- 散金: 15
- 红花: 7
- 帖子: 1793
- 在线: 288.5小时
- 虫号: 264514
- 注册: 2006-07-08
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
10楼2009-10-19 13:25:30
10