24小时热门版块排行榜    

查看: 962  |  回复: 9
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

caiqingchong

木虫 (著名写手)

[交流] 关于基因敲除时敲除菌株的筛选问题

现在用PSUP自杀质粒构建自杀载体后(目的基因内部插入了卡那基因),转到目的菌株内,长出了一片菌落,然后挑取单菌落,分别点到含链霉素+氯霉素平板和链霉素+卡那霉素平板上,野生菌株抗链霉素。

        理论上敲除了目的基因的菌株应该是在链霉素+卡那霉素平板上生长但在链霉素+氯霉素平板上不长的,但筛选了几百个菌落,在两个平板上都生长,这是不是说明没有能够敲除啊,如何筛选才能更快的筛除来敲除菌株呢?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by caiqingchong at 2009-9-21 16:00:
现在用PSUP自杀质粒构建自杀载体后(目的基因内部插入了卡那基因),转到目的菌株内,长出了一片菌落,然后挑取单菌落,分别点到含链霉素+氯霉素平板和链霉素+卡那霉素平板上,野生菌株抗链霉素。

        理论 ...

也就是说你用氯霉素来作为阴性control的对吧?你的阴性control上都长了很多菌落,你应该先思考一下这是为什么吧!先不要想有没有敲掉。
7楼2009-09-25 20:07:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

caiqingchong

木虫 (著名写手)

还是没人了解吗?
3楼2009-09-23 22:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
氯霉素是不是质粒自带的,而卡那是基因内部的插入的,看不太懂,我也是做基因敲除的,但用的是Red 系统
为梦想努力。
4楼2009-09-23 23:59:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

經天

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
前段时间我也做过,也是插入卡那的,筛选的结果挺好的,你的两个都长,问题可能是:1、你的原始菌株做过卡那的抗性实验吗,有可能是出发菌株具有了卡那的抗性;2、一般缺陷型的构建一个maker gene是不够的,至少需要两个,还要进行目的基因的功能缺失验证,即使长的很多只要最后一步做好了就够了。
另外的野生菌株和突变后的菌株都有链霉素的抗性以后就没有必要再加链霉素了
一种与世无争的上进,内在的坚毅和质朴无华的大度!【穷吾一生而追求之!】
8楼2009-09-25 21:18:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +74 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 78/3900 2026-08-14 09:15 by PZezpUHEM8W9
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +4 启萌科技 2026-08-12 12/600 2026-08-14 09:07 by switchoff
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
请填处理意见