24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 887  |  回复: 9
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

caiqingchong

木虫 (著名写手)

[交流] 关于基因敲除时敲除菌株的筛选问题

现在用PSUP自杀质粒构建自杀载体后(目的基因内部插入了卡那基因),转到目的菌株内,长出了一片菌落,然后挑取单菌落,分别点到含链霉素+氯霉素平板和链霉素+卡那霉素平板上,野生菌株抗链霉素。

        理论上敲除了目的基因的菌株应该是在链霉素+卡那霉素平板上生长但在链霉素+氯霉素平板上不长的,但筛选了几百个菌落,在两个平板上都生长,这是不是说明没有能够敲除啊,如何筛选才能更快的筛除来敲除菌株呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caiqingchong

木虫 (著名写手)

还是没人了解吗?
3楼2009-09-23 22:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
氯霉素是不是质粒自带的,而卡那是基因内部的插入的,看不太懂,我也是做基因敲除的,但用的是Red 系统
为梦想努力。
4楼2009-09-23 23:59:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by caiqingchong at 2009-9-21 16:00:
现在用PSUP自杀质粒构建自杀载体后(目的基因内部插入了卡那基因),转到目的菌株内,长出了一片菌落,然后挑取单菌落,分别点到含链霉素+氯霉素平板和链霉素+卡那霉素平板上,野生菌株抗链霉素。

        理论 ...

也就是说你用氯霉素来作为阴性control的对吧?你的阴性control上都长了很多菌落,你应该先思考一下这是为什么吧!先不要想有没有敲掉。
7楼2009-09-25 20:07:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

經天

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
前段时间我也做过,也是插入卡那的,筛选的结果挺好的,你的两个都长,问题可能是:1、你的原始菌株做过卡那的抗性实验吗,有可能是出发菌株具有了卡那的抗性;2、一般缺陷型的构建一个maker gene是不够的,至少需要两个,还要进行目的基因的功能缺失验证,即使长的很多只要最后一步做好了就够了。
另外的野生菌株和突变后的菌株都有链霉素的抗性以后就没有必要再加链霉素了
一种与世无争的上进,内在的坚毅和质朴无华的大度!【穷吾一生而追求之!】
8楼2009-09-25 21:18:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿南科大生物学297分,求调剂推荐 +10 Y-yyusx 2026-04-06 11/550 2026-04-13 09:30 by mfyue2000
[考研] 085410 273求调剂 +10 X1999 2026-04-09 10/500 2026-04-12 09:24 by 逆水乘风
[考研] 327求调剂 +5 拾光任染 2026-04-06 5/250 2026-04-12 02:29 by 秋豆菜芽
[考研] 331求调剂 +5 王国帅 2026-04-11 5/250 2026-04-11 22:56 by 溪涧流水
[考研] 267求调剂 +8 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:42 by cfdbai
[考研] 293求调剂 +8 勇远库爱314 2026-04-06 8/400 2026-04-11 20:25 by 蓝云思雨
[考研] 0859,337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 11:34 by caotw2020
[考研] 化学308分求调剂 +22 你好明天你好 2026-04-07 24/1200 2026-04-11 11:14 by ChemPharm
[考研] 还有化工二轮调剂的学校吗 5+14 化工人999 2026-04-09 48/2400 2026-04-11 10:27 by 89436494
[考研] 本科西工大 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:00 by 来看流星雨10
[考研] 青岛科技大学材料学院,环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
[考研] 一志愿中科大070300化学,314分求调剂 +12 wakeluofu 2026-04-09 12/600 2026-04-10 09:57 by liuhuiying09
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 327求调剂 +10 Xxjc1107. 2026-04-06 11/550 2026-04-09 01:21 by lature00
[考研] 一志愿华南师范大学0702物理学305调剂 +4 念常安 2026-04-07 6/300 2026-04-08 22:53 by bljnqdcc
[考研] 293分求调剂,外语为俄语 +7 加一一九 2026-04-07 10/500 2026-04-08 20:14 by yutian743
[考研] 323求调剂 +3 林zlu 2026-04-07 4/200 2026-04-07 23:21 by lbsjt
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
[考研] 22408 331分求调剂 +4 y__1 2026-04-06 4/200 2026-04-06 17:26 by 土木硕士招生
[考研] 求调剂到材料 +5 程9915 2026-04-06 5/250 2026-04-06 15:21 by yulian1987
信息提示
请填处理意见