应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » DNA单链退火形成双链
71/1返回列表
查看: 5968  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zzzzz347

新虫 (初入文坛)

[交流] DNA单链退火形成双链 已有6人参与

我自己设计了两条完全互补的DNA单链，用纯水稀释，95℃热激5min，室温退火，通过凝胶电泳验证，发现只能形成很少的双链。但是用同样的操作处理文献中的两条单链DNA，是能够成功合成大量的双链的。有没有大佬知道这是什么问题？
自己在网上尝试了几种退火缓冲，也更改过热激温度，但效果不明显，到现在还是只有极少数的双链，大部分序列还是单链，问题到底出在哪里
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2021-05-28 16:24:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你可以问一下合成序列的公司，让他们的销售联系一下技术服务。一般大一点公司都会做这些。
我没做过这个，但是感觉这个要精确控制降温速度吧！降低退火降温速度，试试梯度降温？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2021-05-30 08:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChen

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
短双链退火是一件很容易的事情，随便做都能成功

长链、高GC含量、有复杂二级结构的，延长高温时间、用PCR仪缓慢降温、加DMSO
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2021-05-30 11:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grm枫

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你设计的片段有自身二聚体产生
赞一下 回复此楼
4楼2021-05-31 13:32:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

仰望守护

银虫 (正式写手)
用Unpack模拟分析一下

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2021-07-17 00:46:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lapt

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
在一定浓度的含镁离子（2-10mM）的tris缓冲溶液退火即可

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2021-09-16 09:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zl52

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by BioChen at 2021-05-30 11:15:01
短双链退火是一件很容易的事情，随便做都能成功

长链、高GC含量、有复杂二级结构的，延长高温时间、用PCR仪缓慢降温、加DMSO

我也遇到了这个问题 之前的样品都没事儿  现在重复合成双链 却都是部分合成 也不知道哪里出了问题

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2021-12-24 20:17:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zzzzz347 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上意见出来了 +11 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 20/1000 2026-08-31 17:36 by dxcharlary
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭