24小时热门版块排行榜    

查看: 5936  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zzzzz347

新虫 (初入文坛)

[交流] DNA单链退火形成双链 已有6人参与

我自己设计了两条完全互补的DNA单链,用纯水稀释,95℃热激5min,室温退火,通过凝胶电泳验证,发现只能形成很少的双链。但是用同样的操作处理文献中的两条单链DNA,是能够成功合成大量的双链的。有没有大佬知道这是什么问题?
自己在网上尝试了几种退火缓冲,也更改过热激温度,但效果不明显,到现在还是只有极少数的双链,大部分序列还是单链,问题到底出在哪里
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lapt

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
在一定浓度的含镁离子(2-10mM)的tris缓冲溶液退火即可

发自小木虫IOS客户端
6楼2021-09-16 09:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你可以问一下合成序列的公司,让他们的销售联系一下技术服务。一般大一点公司都会做这些。
我没做过这个,但是感觉这个要精确控制降温速度吧!降低退火降温速度,试试梯度降温?

发自小木虫Android客户端
2楼2021-05-30 08:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChen

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
短双链退火是一件很容易的事情,随便做都能成功

长链、高GC含量、有复杂二级结构的,延长高温时间、用PCR仪缓慢降温、加DMSO
3楼2021-05-30 11:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grm枫

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你设计的片段有自身二聚体产生
4楼2021-05-31 13:32:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +4 archvillain 2026-08-15 7/350 2026-08-15 11:44 by archvillain
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 07:09 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:41 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见