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zzzzz347

新虫 (初入文坛)

[交流] DNA单链退火形成双链 已有6人参与

我自己设计了两条完全互补的DNA单链,用纯水稀释,95℃热激5min,室温退火,通过凝胶电泳验证,发现只能形成很少的双链。但是用同样的操作处理文献中的两条单链DNA,是能够成功合成大量的双链的。有没有大佬知道这是什么问题?
自己在网上尝试了几种退火缓冲,也更改过热激温度,但效果不明显,到现在还是只有极少数的双链,大部分序列还是单链,问题到底出在哪里
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)


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你可以问一下合成序列的公司,让他们的销售联系一下技术服务。一般大一点公司都会做这些。
我没做过这个,但是感觉这个要精确控制降温速度吧!降低退火降温速度,试试梯度降温?

发自小木虫Android客户端
2楼2021-05-30 08:10:05
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BioChen

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
短双链退火是一件很容易的事情,随便做都能成功

长链、高GC含量、有复杂二级结构的,延长高温时间、用PCR仪缓慢降温、加DMSO
3楼2021-05-30 11:15:01
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grm枫

铁虫 (初入文坛)


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你设计的片段有自身二聚体产生
4楼2021-05-31 13:32:30
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仰望守护

银虫 (正式写手)

5楼2021-07-17 00:46:38
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lapt

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
在一定浓度的含镁离子(2-10mM)的tris缓冲溶液退火即可

发自小木虫IOS客户端
6楼2021-09-16 09:01:57
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zl52

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by BioChen at 2021-05-30 11:15:01
短双链退火是一件很容易的事情,随便做都能成功

长链、高GC含量、有复杂二级结构的,延长高温时间、用PCR仪缓慢降温、加DMSO

我也遇到了这个问题 之前的样品都没事儿  现在重复合成双链 却都是部分合成 也不知道哪里出了问题

发自小木虫Android客户端
7楼2021-12-24 20:17:17
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