| 查看: 1753 | 回复: 9 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者lostunit将赠送您 10 个金币 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
lostunit新虫 (小有名气)
|
[求助]
表达的蛋白质用tev酶切割后，目标蛋白无法与原蛋白分离
|
|
|
我的蛋白在表达后需要用tev酶切除His标签，可是切完后总是切不完，而且切下来的目标蛋白好像会和原蛋白有相互作用，无法再用Ni-NTA分离(切下来的目标蛋白已经没有了his标签，却无法从镍柱上洗脱下来，之后用凝胶层析也无法将原蛋白和切下来的蛋白分离，SDSPAGE显示两种蛋白在同一个峰里)。 现在我考虑的是两种方法: 1. 提高tev酶的活性，将原蛋白尽量全部酶切，只剩下目标蛋白和切下来的his标签，这样就能分离出目标蛋白。但尝试很多条件都无法达到，总是剩下大概一半的蛋白切不动。 2. 添加一些试剂破坏原蛋白和目标蛋白的相互作用。我的蛋白里有很多二硫键，所以试过GSH和GSSG，但没有用。 大家有没有什么好方法呢？ @飞约疯人院 @wizardfan @biostar2009 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有141人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
4楼2021-01-26 07:25:37
2楼2021-01-25 22:30:54
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
3楼2021-01-26 07:24:28
lostunit
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 58.2
- 散金: 140
- 帖子: 58
- 在线: 18.5小时
- 虫号: 19696490
- 注册: 2019-11-12
- 专业: 食品科学基础
5楼2021-01-26 08:30:00
