应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Cas12a-crRNA复合体切割荧光报告分子，最后荧光强度很不稳定，求助！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1630  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者一粒米饭的饭将赠送您 10 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

一粒米饭的饭

新虫 (小有名气)

[求助] Cas12a-crRNA复合体切割荧光报告分子，最后荧光强度很不稳定，求助！！ 已有1人参与

Cas12a-crRNA复合体切割荧光报告分子，最后体系中的荧光强度也太不稳定了，求助是哪里出了问题？
具体过程就是先核算恒温扩增，然后cas12a-crRNA复合体识别扩增产物并切割荧光报告分子。
操作在冰上进行，已经尽量控制每管的扩增时间和切割时间相同了。而且我是把其他试剂先混合后再分装与靶标核酸孵育反应的。
最后用qPCR仪测荧光，每次差距都特别大。我做了好多次，取其中最接近的三次结果做了误差棒，如图，还是很差。求助这是怎么回事儿啊？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2020-10-12 17:00:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一粒米饭的饭

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pennchem at 2020-10-13 09:01:05
差别在恒温扩增这一段吧，差异性较大，如果起始靶标浓度高一些，相对结果会稳定一些。

对的，就是恒温扩增那一步有差别的。因为我在做灵敏度分析，就想看看最低检测限是多少，但是就结果很不稳定。那我再重复一下高浓度试试看，是我这个体系结果不稳定还是因为靶标浓度低导致信号不稳定。感谢您回复！！

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2020-10-13 14:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

junjieshao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
2楼2020-10-13 05:00:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
差别在恒温扩增这一段吧，差异性较大，如果起始靶标浓度高一些，相对结果会稳定一些。
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
3楼2020-10-13 09:01:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一粒米饭的饭

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by junjieshao at 2020-10-13 05:00:06
看不到图，一般情况下误差大，如果排除其他原因，我猜就是信号不够高。就是扩增产物不够多。

不好意思，我也不知道怎么回事总发不了图片，但是荧光强度确实像您讲的那样，不高，高浓度的是500左右，低一点的是200左右。那我再尝试增加扩增时间看看能不能增加一点产物量。或许您了解qPCR仪么，我现在有点怀疑是不是我不应该用qPCR仪来检测这个体系的荧光呀？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2020-10-13 14:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 287求调剂 +7 land xuxu 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:44 by wxiongid
[考研] 316求调剂 +4 江辞666 2026-03-26 4/200 2026-03-27 00:33 by wxiongid
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 材料学硕333求调剂 +7 北道巷 2026-03-24 7/350 2026-03-27 00:30 by wxiongid
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +7 NIFFFfff 2026-03-20 7/350 2026-03-26 20:45 by 不吃魚的貓
[考研] 08开头275求调剂 +3 拉谁不重要 2026-03-26 3/150 2026-03-26 20:22 by barlinike
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 食品专硕 一志愿双一流 328 +3 xiaom99 2026-03-21 4/200 2026-03-24 21:20 by lailaisimei
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭