| 查看: 1923 | 回复: 4 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者一粒米饭的饭将赠送您 10 个金币 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
Cas12a-crRNA复合体切割荧光报告分子，最后荧光强度很不稳定，求助！！ 已有1人参与
|
||
|
Cas12a-crRNA复合体切割荧光报告分子，最后体系中的荧光强度也太不稳定了，求助是哪里出了问题？ 具体过程就是先核算恒温扩增，然后cas12a-crRNA复合体识别扩增产物并切割荧光报告分子。 操作在冰上进行，已经尽量控制每管的扩增时间和切割时间相同了。而且我是把其他试剂先混合后再分装与靶标核酸孵育反应的。 最后用qPCR仪测荧光，每次差距都特别大。我做了好多次，取其中最接近的三次结果做了误差棒，如图，还是很差。求助这是怎么回事儿啊？ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有190人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
3楼2020-10-13 09:01:05
junjieshao
禁虫 (小有名气)
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2020-10-13 05:00:06
|
不好意思，我也不知道怎么回事总发不了图片  ，但是荧光强度确实像您讲的那样，不高，高浓度的是500左右，低一点的是200左右。那我再尝试增加扩增时间看看能不能增加一点产物量。或许您了解qPCR仪么，我现在有点怀疑是不是我不应该用qPCR仪来检测这个体系的荧光呀？发自小木虫IOS客户端 |
4楼2020-10-13 14:13:50
|
对的，就是恒温扩增那一步有差别的。因为我在做灵敏度分析，就想看看最低检测限是多少，但是就结果很不稳定。那我再重复一下高浓度试试看，是我这个体系结果不稳定还是因为靶标浓度低导致信号不稳定。感谢您回复！！ 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2020-10-13 14:17:14