应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Cas12a-crRNA复合体切割荧光报告分子，最后荧光强度很不稳定，求助！！
51/1返回列表
查看: 1618  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者一粒米饭的饭将赠送您 10 个金币

一粒米饭的饭

新虫 (小有名气)

[求助] Cas12a-crRNA复合体切割荧光报告分子，最后荧光强度很不稳定，求助！！ 已有1人参与

Cas12a-crRNA复合体切割荧光报告分子，最后体系中的荧光强度也太不稳定了，求助是哪里出了问题？
具体过程就是先核算恒温扩增，然后cas12a-crRNA复合体识别扩增产物并切割荧光报告分子。
操作在冰上进行，已经尽量控制每管的扩增时间和切割时间相同了。而且我是把其他试剂先混合后再分装与靶标核酸孵育反应的。
最后用qPCR仪测荧光，每次差距都特别大。我做了好多次，取其中最接近的三次结果做了误差棒，如图，还是很差。求助这是怎么回事儿啊？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2020-10-12 17:00:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junjieshao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
2楼2020-10-13 05:00:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
差别在恒温扩增这一段吧，差异性较大，如果起始靶标浓度高一些，相对结果会稳定一些。
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
3楼2020-10-13 09:01:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一粒米饭的饭

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by junjieshao at 2020-10-13 05:00:06
看不到图，一般情况下误差大，如果排除其他原因，我猜就是信号不够高。就是扩增产物不够多。

不好意思，我也不知道怎么回事总发不了图片，但是荧光强度确实像您讲的那样，不高，高浓度的是500左右，低一点的是200左右。那我再尝试增加扩增时间看看能不能增加一点产物量。或许您了解qPCR仪么，我现在有点怀疑是不是我不应该用qPCR仪来检测这个体系的荧光呀？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2020-10-13 14:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一粒米饭的饭

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pennchem at 2020-10-13 09:01:05
差别在恒温扩增这一段吧，差异性较大，如果起始靶标浓度高一些，相对结果会稳定一些。

对的，就是恒温扩增那一步有差别的。因为我在做灵敏度分析，就想看看最低检测限是多少，但是就结果很不稳定。那我再重复一下高浓度试试看，是我这个体系结果不稳定还是因为靶标浓度低导致信号不稳定。感谢您回复！！

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2020-10-13 14:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 一粒米饭的饭 的主题更新
51/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 求调剂 +6 十三加油 2026-03-21 6/300 2026-03-22 17:00 by i_cooler
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 302求调剂 +12 呼呼呼。。。。 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:29 by ColorlessPI
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[论文投稿] 申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭