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农杆菌转化
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我是讲载体与目的基因酶切后链接转入大肠杆菌感受态细胞中，摇菌提质粒后双酶切验证条带也没问题，用验证过的质粒采用冻融法转EH105农杆菌，在含卡娜和利福平的平板上培养，长单菌落，挑完摇菌后菌液pcr却没有条带，，重复3次，别人带了一次，别人菌有带我的还是没有，求各位大神帮忙分析一下问题所在，感谢 发自小木虫Android客户端 |
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木元雨
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2楼2020-07-13 23:43:29
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4楼2020-07-14 13:32:26
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5楼2020-07-14 21:00:20
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首先看长菌时间对不对，需要在36-48h之间长起来的才是正确的菌，时间早了完了都是杂菌！其次农杆菌抗性本身容易失效，如果48h只长了不到10个克隆，很可能是杂菌！如果长了100个克隆以上，肯定是转化成功了！ 发自小木虫Android客户端 |
6楼2020-07-27 22:19:15
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农杆菌有细胞壁菌落PCR比较难，需要选用扩增能力强的taq酶，而且P出来也不会太亮！用质粒小提也可以，提10ml菌液30ul洗脱，10ul电泳可见条带，PCR也容易 发自小木虫Android客户端 |
7楼2020-07-27 22:21:37
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