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求学。

新虫 (初入文坛)

[求助] 农杆菌转化

我是讲载体与目的基因酶切后链接转入大肠杆菌感受态细胞中,摇菌提质粒后双酶切验证条带也没问题,用验证过的质粒采用冻融法转EH105农杆菌,在含卡娜和利福平的平板上培养,长单菌落,挑完摇菌后菌液pcr却没有条带,,重复3次,别人带了一次,别人菌有带我的还是没有,求各位大神帮忙分析一下问题所在,感谢

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zhz0809

新虫 (初入文坛)

农杆菌有细胞壁菌落PCR比较难,需要选用扩增能力强的taq酶,而且P出来也不会太亮!用质粒小提也可以,提10ml菌液30ul洗脱,10ul电泳可见条带,PCR也容易

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7楼2020-07-27 22:21:37
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木元雨

木虫 (职业作家)

大肠杆菌的那个菌液怎么做的pcr检测呢?

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2楼2020-07-13 23:43:29
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)

3楼2020-07-14 01:01:22
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owl2010

金虫 (正式写手)

浓杆菌的细胞壁很厚,挑的菌落摇菌后可以吸取100ul至1.5ml离心管高速离心再加50ul水混匀后80度金属浴10分钟后,用此裂解液模板做PCR。
男人的组成要素:金钱、面子、性、怕死、自恋、吹牛逼。
4楼2020-07-14 13:32:26
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