| 查看: 1393 | 回复: 8 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者求学。将赠送您 5 个金币 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
农杆菌转化
|
||
|
我是讲载体与目的基因酶切后链接转入大肠杆菌感受态细胞中，摇菌提质粒后双酶切验证条带也没问题，用验证过的质粒采用冻融法转EH105农杆菌，在含卡娜和利福平的平板上培养，长单菌落，挑完摇菌后菌液pcr却没有条带，，重复3次，别人带了一次，别人菌有带我的还是没有，求各位大神帮忙分析一下问题所在，感谢 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
球磨纳米粒子条件
已经有6人回复
-
球磨分散剂
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有216人回复
-
阴阳离子交换剂！！！！
已经有3人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有11人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有10人回复
-
酸酐或者羧酸酰氯化
已经有15人回复
-
酚羟基接入磷酸，磷酸酯化
已经有26人回复
|
首先看长菌时间对不对，需要在36-48h之间长起来的才是正确的菌，时间早了完了都是杂菌！其次农杆菌抗性本身容易失效，如果48h只长了不到10个克隆，很可能是杂菌！如果长了100个克隆以上，肯定是转化成功了！ 发自小木虫Android客户端 |
6楼2020-07-27 22:19:15
|
农杆菌有细胞壁菌落PCR比较难，需要选用扩增能力强的taq酶，而且P出来也不会太亮！用质粒小提也可以，提10ml菌液30ul洗脱，10ul电泳可见条带，PCR也容易 发自小木虫Android客户端 |
7楼2020-07-27 22:21:37
5