应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 化学分析 » C18色谱柱可能被蛋白质污染了，常规冲柱方法都没有用该咋办
71/1返回列表
查看: 2429  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

癫狂版

铁虫 (初入文坛)

[求助] C18色谱柱可能被蛋白质污染了，常规冲柱方法都没有用该咋办 已有2人参与

前段时间在做代谢实验，由于普通的甲醇乙腈变性蛋白质使我的目标化合物无法检测到，于是参考文献尝试少量甲酸变性，结果最近柱压升的厉害，虽然本来也很高了。色谱柱为ACE excel3 C18-AR，目前初始95：5水乙腈，0.6流速柱压240bar+。这个条件是更换了预柱柱心，液相脱气阀的一个柱芯后的柱压。
    尝试了几种冲洗方法：
1、高水相低流速正冲；
2、纯甲醇低流速正冲；
3、咨询技术支持后90：10乙腈水，低流速逐渐升高反冲；
4、（技术支持）85：15异丙醇水低流速反冲。
    目前看效果都不明显。
    试了这么多办法，很多不得不用的办法都用上了还是没效果，目前还是觉得最有可能的污染物是蛋白质，不过不能确定污染物是否只在筛板还是已经进到柱头里了，非常绝望，求助一下各位大神，还有什么除了换柱子的其他路子再拯救一下，谢谢大家了
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2020-04-02 17:34:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

癫狂版

铁虫 (初入文坛)
蛋白质变性后离心两次后再过滤膜上机的，现在回想可能是由于甲酸加入量比较小导致变性不彻底，遇到流动相后进一步变性？担心变性后蛋白在柱子里析出
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2020-04-02 17:42:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
癫狂版: 金币+5, ★★★很有帮助 2020-04-07 14:56:30
往流动相里面加点TFA试试
赞一下 回复此楼
3楼2020-04-03 13:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

癫狂版

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lifucheng at 2020-04-03 13:32:13
往流动相里面加点TFA试试

查找了相关文献确实也看到了用TFA和一些表活的相关表述，我买了TFA等到货了就按文献上的配比试一下，想问问您有没有试过用SDS或者其他表活请洗柱子呢
赞一下 回复此楼
4楼2020-04-07 14:58:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柳絮虫

新虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
癫狂版: 金币+5, ★★★很有帮助 2020-04-10 09:55:09
既然怀疑是蛋白变性，又没什么办法搞定。那就使用95%水-甲醇，小流量反冲。
或者卸下筛板，纯水超声清洗，纯甲醇超声
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2020-04-08 09:42:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifucheng

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 癫狂版 at 2020-04-07 14:58:44
查找了相关文献确实也看到了用TFA和一些表活的相关表述，我买了TFA等到货了就按文献上的配比试一下，想问问您有没有试过用SDS或者其他表活请洗柱子呢...

说实话 没有用过 我做化药小分子的 大分子很少做 SDS之类的表面活性剂我平时躲还来不及 咋会用这些去洗
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2020-04-08 16:16:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

癫狂版

铁虫 (初入文坛)
谢谢@柳絮虫 和@lifucheng两个老师，用0.1%的tfa溶液低流速冲柱子以后柱压一段时间内有下降，但是柱压仍然处于偏高状态，最后卸下筛板超声，把柱头填料刮去一点点后柱压基本恢复，比之前略高一点。重新测的代谢前的样品，出峰时间大体一致，柱效貌似更高了，谢谢两位老师

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2020-04-14 16:10:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 癫狂版 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:39 by 9i7PCSZyMzot
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:27 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:15 by 9i7PCSZyMzot
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:15 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:03 by 9i7PCSZyMzot
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 3/150 2026-09-20 00:15 by 9i7PCSZyMzot
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 3/150 2026-09-20 00:03 by 9i7PCSZyMzot
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-20 00:03 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:51 by 9i7PCSZyMzot
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:39 by 9i7PCSZyMzot
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:27 by 9i7PCSZyMzot
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:27 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:03 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-18 7/350 2026-09-19 21:03 by 9i7PCSZyMzot
[教师之家] 现代”学阀”该如何界定 +3 iaeyuan 2026-09-19 3/150 2026-09-19 20:52 by 没昵称呀
[基金申请] 国社科系统bug了，是不是要放榜了？ +7 kynobel 2026-09-16 9/450 2026-09-19 14:52 by 接好运婷
[考博] 申博发邮件 +8 Lmengk 2026-09-15 9/450 2026-09-19 09:27 by 中间体超市
[有机交流] 各位大神，目前国内有哪些比较好用的逆合成软件？ 20+3 zapen 2026-09-15 9/450 2026-09-18 18:17 by zapen
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组｜2027级博士研究生招生公告 +7 水士口 2026-09-16 8/400 2026-09-16 13:47 by kkklens
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +8 两三岁ss 2026-09-14 8/400 2026-09-16 09:46 by 水士口
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭