24小时热门版块排行榜    

查看: 2016  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

癫狂版

铁虫 (初入文坛)

[求助] C18色谱柱可能被蛋白质污染了,常规冲柱方法都没有用该咋办 已有2人参与

前段时间在做代谢实验,由于普通的甲醇乙腈变性蛋白质使我的目标化合物无法检测到,于是参考文献尝试少量甲酸变性,结果最近柱压升的厉害,虽然本来也很高了。色谱柱为ACE excel3 C18-AR,目前初始95:5水乙腈,0.6流速柱压240bar+。这个条件是更换了预柱柱心,液相脱气阀的一个柱芯后的柱压。
    尝试了几种冲洗方法:
1、高水相低流速正冲;
2、纯甲醇低流速正冲;
3、咨询技术支持后90:10乙腈水,低流速逐渐升高反冲;
4、(技术支持)85:15异丙醇水低流速反冲。
    目前看效果都不明显。
    试了这么多办法,很多不得不用的办法都用上了还是没效果,目前还是觉得最有可能的污染物是蛋白质,不过不能确定污染物是否只在筛板还是已经进到柱头里了,非常绝望,求助一下各位大神,还有什么除了换柱子的其他路子再拯救一下,谢谢大家了
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

癫狂版

铁虫 (初入文坛)

谢谢@柳絮虫 和@lifucheng两个老师,用0.1%的tfa溶液低流速冲柱子以后柱压一段时间内有下降,但是柱压仍然处于偏高状态,最后卸下筛板超声,把柱头填料刮去一点点后柱压基本恢复,比之前略高一点。重新测的代谢前的样品,出峰时间大体一致,柱效貌似更高了,谢谢两位老师

发自小木虫Android客户端
7楼2020-04-14 16:10:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

癫狂版

铁虫 (初入文坛)

蛋白质变性后离心两次后再过滤膜上机的,现在回想可能是由于甲酸加入量比较小导致变性不彻底,遇到流动相后进一步变性?担心变性后蛋白在柱子里析出
2楼2020-04-02 17:42:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
癫狂版: 金币+5, ★★★很有帮助 2020-04-07 14:56:30
往流动相里面加点TFA试试
3楼2020-04-03 13:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

癫狂版

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lifucheng at 2020-04-03 13:32:13
往流动相里面加点TFA试试

查找了相关文献确实也看到了用TFA和一些表活的相关表述,我买了TFA等到货了就按文献上的配比试一下,想问问您有没有试过用SDS或者其他表活请洗柱子呢
4楼2020-04-07 14:58:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 26申博自荐 +7 烷基八氮- 2026-03-06 8/400 2026-03-07 13:42 by ztg729
[考研] 售渎SCI文章,我:8⊙ 55 1⊙ 54。备注【⊙=0】 +3 ipys00zm58 2026-03-06 4/200 2026-03-07 03:57 by vwchyxxzm4
[考研] 一志愿华中科技大学,化学专业344分,求调剂 +7 邢xing1 2026-03-02 7/350 2026-03-06 09:14 by guoweigw
[考研] 求调剂 +5 danyyyy 2026-03-04 5/250 2026-03-06 08:16 by Leeding1356
[考研] 332材料求调剂 +6 zjy101327 2026-03-05 7/350 2026-03-06 00:18 by wutongshun
[考研] 334求调剂 +6 Trying] 2026-03-05 8/400 2026-03-06 00:16 by wutongshun
[考研] 复试调剂 +5 呼呼?~+123456 2026-03-05 5/250 2026-03-05 19:43 by caszguilin
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-04 3/150 2026-03-05 10:39 by Iveryant
[考研] 304分材料专硕求调剂 +11 qiuzhigril 2026-03-03 14/700 2026-03-05 09:30 by vfdbghn
[考研] 307求调剂 +4 xuyuan111 2026-03-04 5/250 2026-03-04 20:39 by kakakapanpan
[考研] 0703化学求调剂,总分320分,一志愿中南民族大学 +3 19286712440 2026-03-04 3/150 2026-03-04 18:30 by houyaoxu
[考研] 347分电子信息专硕求调剂 +3 咕嘟咕嘟1 2026-03-03 3/150 2026-03-04 12:32 by 热情沙漠
[考研] 一志愿西工大材料学,英一数二总分321分,求调剂。 +3 zz05zz 2026-03-02 5/250 2026-03-04 09:16 by lbsjt
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +5 Qwertyuop 2026-03-01 5/250 2026-03-03 17:50 by 梅子鸭鸭
[考研] 289求调剂 +7 BrightLL 2026-03-02 9/450 2026-03-03 16:02 by tgxtgxtgx9
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +4 weizhong123 2026-03-01 5/250 2026-03-03 12:22 by weizhong123
[考研] 307求调剂 +6 wyyyqx 2026-03-01 6/300 2026-03-03 09:24 by 2235787770
[考研] 材料284求调剂,一志愿郑州大学英一数二专硕 +15 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 15/750 2026-03-02 20:13 by hypershenger
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
信息提示
请填处理意见