24小时热门版块排行榜    

查看: 2019  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

癫狂版

铁虫 (初入文坛)

[求助] C18色谱柱可能被蛋白质污染了,常规冲柱方法都没有用该咋办 已有2人参与

前段时间在做代谢实验,由于普通的甲醇乙腈变性蛋白质使我的目标化合物无法检测到,于是参考文献尝试少量甲酸变性,结果最近柱压升的厉害,虽然本来也很高了。色谱柱为ACE excel3 C18-AR,目前初始95:5水乙腈,0.6流速柱压240bar+。这个条件是更换了预柱柱心,液相脱气阀的一个柱芯后的柱压。
    尝试了几种冲洗方法:
1、高水相低流速正冲;
2、纯甲醇低流速正冲;
3、咨询技术支持后90:10乙腈水,低流速逐渐升高反冲;
4、(技术支持)85:15异丙醇水低流速反冲。
    目前看效果都不明显。
    试了这么多办法,很多不得不用的办法都用上了还是没效果,目前还是觉得最有可能的污染物是蛋白质,不过不能确定污染物是否只在筛板还是已经进到柱头里了,非常绝望,求助一下各位大神,还有什么除了换柱子的其他路子再拯救一下,谢谢大家了
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
癫狂版: 金币+5, ★★★很有帮助 2020-04-07 14:56:30
往流动相里面加点TFA试试
3楼2020-04-03 13:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

癫狂版

铁虫 (初入文坛)

蛋白质变性后离心两次后再过滤膜上机的,现在回想可能是由于甲酸加入量比较小导致变性不彻底,遇到流动相后进一步变性?担心变性后蛋白在柱子里析出
2楼2020-04-02 17:42:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

癫狂版

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lifucheng at 2020-04-03 13:32:13
往流动相里面加点TFA试试

查找了相关文献确实也看到了用TFA和一些表活的相关表述,我买了TFA等到货了就按文献上的配比试一下,想问问您有没有试过用SDS或者其他表活请洗柱子呢
4楼2020-04-07 14:58:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柳絮虫

新虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
癫狂版: 金币+5, ★★★很有帮助 2020-04-10 09:55:09
既然怀疑是蛋白变性,又没什么办法搞定。那就使用95%水-甲醇,小流量反冲。
或者卸下筛板,纯水超声清洗,纯甲醇超声
5楼2020-04-08 09:42:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售渎SCI文章,我:8⊙ 55 1⊙ 54。备注【⊙=0】 +4 ipys00zm58 2026-03-06 7/350 2026-03-07 11:42 by 68vlfw6g5q
[考研] 276求调剂 本科天津工业大学 一志愿北京化工大学0855 +4 路lyh123 2026-03-06 6/300 2026-03-07 11:37 by shdliugang
[考研] 286求调剂 +9 Faune 2026-03-06 10/500 2026-03-06 16:31 by 学员FnSWZj
[考研] 材料工程调剂 +6 zbcm_zbcm 2026-03-05 6/300 2026-03-06 15:36 by @飒飒飒飒
[考研] 275求调剂 +4 大爆炸难民 2026-03-06 5/250 2026-03-06 09:21 by guoweigw
[考研] 083000,总分284,求调剂 +3 徐yr 2026-03-04 3/150 2026-03-05 22:33 by Y比B卜
[考研] 一志愿苏大材料工程专硕293求调剂 +3 钢铁大炮 2026-03-04 3/150 2026-03-05 21:07 by 黑衣馒头人
[考研] 274求调剂 +9 一个学习者 2026-03-04 9/450 2026-03-05 20:56 by 黑衣馒头人
[考研] 复试调剂 +5 呼呼?~+123456 2026-03-05 5/250 2026-03-05 19:43 by caszguilin
[考研] 中国科学技术大学材料与化工281求调剂,有科研和获奖经历 +11 wsxw 2026-03-02 12/600 2026-03-05 09:49 by oxidpl
[考研] 环境工程专硕307 一志愿211 四六级已过 求调剂 +5 ccc! 2026-03-03 6/300 2026-03-05 09:42 by 热情沙漠
[考研] 267调剂求助 +5 聪少OZ 2026-03-04 5/250 2026-03-05 09:38 by kakakapanpan
[考研] 281电子信息求调剂 +5 jhtfeybgj 2026-03-02 9/450 2026-03-05 09:36 by 085400调剂党
[考研] 化学 0703求调剂 总分293 一志愿211 +9 土土小虫 2026-03-03 11/550 2026-03-05 09:26 by vfdbghn
[考研] 376求调剂 +3 王浩然sam 2026-03-04 3/150 2026-03-05 07:48 by bxbo
[考研] 347分电子信息专硕求调剂 +3 咕嘟咕嘟1 2026-03-03 3/150 2026-03-04 12:32 by 热情沙漠
[考研] 0703化学调剂 +4 G212 2026-03-03 5/250 2026-03-04 09:34 by 每天只摆一小会
[考研] 284求调剂 +6 天下熯 2026-03-02 6/300 2026-03-03 13:46 by Iveryant
[考研] 272求调剂 +9 材紫有化 2026-02-28 9/450 2026-03-02 20:22 by hypershenger
[考博] 诚招农业博士 +3 心欣向荣 2026-02-28 3/150 2026-03-02 13:33 by 时间不狗
信息提示
请填处理意见