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癫狂版

铁虫 (初入文坛)

[求助] C18色谱柱可能被蛋白质污染了,常规冲柱方法都没有用该咋办 已有2人参与

前段时间在做代谢实验,由于普通的甲醇乙腈变性蛋白质使我的目标化合物无法检测到,于是参考文献尝试少量甲酸变性,结果最近柱压升的厉害,虽然本来也很高了。色谱柱为ACE excel3 C18-AR,目前初始95:5水乙腈,0.6流速柱压240bar+。这个条件是更换了预柱柱心,液相脱气阀的一个柱芯后的柱压。
    尝试了几种冲洗方法:
1、高水相低流速正冲;
2、纯甲醇低流速正冲;
3、咨询技术支持后90:10乙腈水,低流速逐渐升高反冲;
4、(技术支持)85:15异丙醇水低流速反冲。
    目前看效果都不明显。
    试了这么多办法,很多不得不用的办法都用上了还是没效果,目前还是觉得最有可能的污染物是蛋白质,不过不能确定污染物是否只在筛板还是已经进到柱头里了,非常绝望,求助一下各位大神,还有什么除了换柱子的其他路子再拯救一下,谢谢大家了
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癫狂版

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lifucheng at 2020-04-03 13:32:13
往流动相里面加点TFA试试

查找了相关文献确实也看到了用TFA和一些表活的相关表述,我买了TFA等到货了就按文献上的配比试一下,想问问您有没有试过用SDS或者其他表活请洗柱子呢
4楼2020-04-07 14:58:44
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查看全部 7 个回答

癫狂版

铁虫 (初入文坛)

蛋白质变性后离心两次后再过滤膜上机的,现在回想可能是由于甲酸加入量比较小导致变性不彻底,遇到流动相后进一步变性?担心变性后蛋白在柱子里析出
2楼2020-04-02 17:42:49
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
癫狂版: 金币+5, ★★★很有帮助 2020-04-07 14:56:30
往流动相里面加点TFA试试
3楼2020-04-03 13:32:13
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柳絮虫

新虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
癫狂版: 金币+5, ★★★很有帮助 2020-04-10 09:55:09
既然怀疑是蛋白变性,又没什么办法搞定。那就使用95%水-甲醇,小流量反冲。
或者卸下筛板,纯水超声清洗,纯甲醇超声
5楼2020-04-08 09:42:27
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