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C18色谱柱可能被蛋白质污染了,常规冲柱方法都没有用该咋办 已有2人参与
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前段时间在做代谢实验,由于普通的甲醇乙腈变性蛋白质使我的目标化合物无法检测到,于是参考文献尝试少量甲酸变性,结果最近柱压升的厉害,虽然本来也很高了。色谱柱为ACE excel3 C18-AR,目前初始95:5水乙腈,0.6流速柱压240bar+。这个条件是更换了预柱柱心,液相脱气阀的一个柱芯后的柱压。 尝试了几种冲洗方法: 1、高水相低流速正冲; 2、纯甲醇低流速正冲; 3、咨询技术支持后90:10乙腈水,低流速逐渐升高反冲; 4、(技术支持)85:15异丙醇水低流速反冲。 目前看效果都不明显。 试了这么多办法,很多不得不用的办法都用上了还是没效果,目前还是觉得最有可能的污染物是蛋白质,不过不能确定污染物是否只在筛板还是已经进到柱头里了,非常绝望,求助一下各位大神,还有什么除了换柱子的其他路子再拯救一下,谢谢大家了 |
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