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如何选择内参抗体
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shishui66
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虫号: 12903483
[交流]
如何选择内参抗体
本人准备做WB实验,要做三个抗体,一个是细胞核蛋白,一个是细胞质蛋白,一个是细胞膜蛋白,可以用同一个内参蛋白β-actin吗?哪家公司的内参蛋白抗体比较好用?
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菁华浮梦77
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1楼
2019-11-19 15:51:22
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虫号: 4464699
★
shishui66(金币+1): 谢谢参与
三种不同亚定位的蛋白需要用到三种不同的内参
发自小木虫IOS客户端
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6楼
2019-11-21 21:06:35
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菁华浮梦77
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虫号: 15934260
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选择内参要考虑目的蛋白分子量,通常要保证目的蛋白和内参蛋白分子相差5kd以上,比如检测目的蛋白分子量45kd,就不适宜选择β-actin(42kd)作为内参,可以考虑GAPDH(36kd)。
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2楼
2019-11-19 16:04:16
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ELISA_小雷
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2楼
:
Originally posted by
菁华浮梦77
at 2019-11-19 16:04:16
选择内参要考虑目的蛋白分子量,通常要保证目的蛋白和内参蛋白分子相差5kd以上,比如检测目的蛋白分子量45kd,就不适宜选择β-actin(42kd)作为内参,可以考虑GAPDH(36kd)。
感谢楼上的提醒,差点忘记考虑分子量问题。
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3楼
2019-11-19 16:12:58
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虫号: 4464699
建议如下:细胞核蛋白一般有两种选择:常用的为Histone-H3,组蛋白Histone H3.1由于是染色体的组成型表达组分,表达比较稳定,经常被作为最广泛的核内参使用。目标蛋白15kd左右,。另外一种是增殖细胞核抗原(PCNA),PCNA即增殖细胞核抗原,因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名,以后的研究发现PCNA与细胞DNA合成关系密切,在细胞增殖的启动上起重要作用,是反映细胞增殖状态的良好指标。在细胞核内合成,并存在于细胞核内,其由261个氨基酸组成,分子量为36KD。
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7楼
2019-11-21 21:06:50
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