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shishui66

铜虫 (小有名气)

[交流] 如何选择内参抗体

本人准备做WB实验，要做三个抗体，一个是细胞核蛋白，一个是细胞质蛋白，一个是细胞膜蛋白，可以用同一个内参蛋白β-actin吗？哪家公司的内参蛋白抗体比较好用？
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菁华浮梦77

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1楼 2019-11-19 15:51:22
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菁华浮梦77

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
选择内参要考虑目的蛋白分子量，通常要保证目的蛋白和内参蛋白分子相差5kd以上，比如检测目的蛋白分子量45kd，就不适宜选择β-actin（42kd）作为内参，可以考虑GAPDH(36kd)。
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2楼2019-11-19 16:04:16
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13297913532

新虫 (正式写手)
★
shishui66(金币+1): 谢谢参与
三种不同亚定位的蛋白需要用到三种不同的内参

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6楼2019-11-21 21:06:35
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ELISA_小雷

捐助贵宾 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 菁华浮梦77 at 2019-11-19 16:04:16
选择内参要考虑目的蛋白分子量，通常要保证目的蛋白和内参蛋白分子相差5kd以上，比如检测目的蛋白分子量45kd，就不适宜选择β-actin（42kd）作为内参，可以考虑GAPDH(36kd)。

感谢楼上的提醒，差点忘记考虑分子量问题。
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3楼2019-11-19 16:12:58
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13297913532

新虫 (正式写手)
建议如下：细胞核蛋白一般有两种选择：常用的为Histone-H3,组蛋白Histone H3.1由于是染色体的组成型表达组分，表达比较稳定，经常被作为最广泛的核内参使用。目标蛋白15kd左右，。另外一种是增殖细胞核抗原（PCNA），PCNA即增殖细胞核抗原，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名，以后的研究发现PCNA与细胞DNA合成关系密切，在细胞增殖的启动上起重要作用，是反映细胞增殖状态的良好指标。在细胞核内合成，并存在于细胞核内，其由261个氨基酸组成，分子量为36KD。

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7楼2019-11-21 21:06:50
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13297913532

新虫 (正式写手)
膜蛋白选择Na/k泵通道蛋白（Na+/K+-ATPase），Na+/K+-ATPase即Na+/K+-ATP酶或Na+/K+-ATP泵，它会使细胞外的Na+浓度高于细胞内，当Na+顺着浓度差进入细胞时，会经由本体蛋白质的运载体将不易通过细胞膜的物质以共同运输的方式带入细胞。其由1023个氨基酸组成，分子量为113KD。

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8楼2019-11-21 21:08:40
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13297913532

新虫 (正式写手)
细胞质蛋白有多种可以选择,GAPDH 36KDa，肌动蛋白（β-Actin）42 kDa，α-tubulin和β-tubulin分子量分别为55kDa和50kDa，其实际检测条带均在55kDa左右。β-tubulin的蛋白水平通常不会发生改变。

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9楼2019-11-21 21:12:49
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新虫 (正式写手)
如果实验中有什么其他的问题，可以加这个微信，包括蛋白，抗体的选择

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10楼2019-11-21 21:16:19
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shishui66

铜虫 (小有名气)
感谢

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11楼2019-11-22 09:37:18
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禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
12楼2019-11-22 09:49:07
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tzynew4楼
2019-11-19 16:33   回复  
shishui66(金币+1): 谢谢参与
miaojiabing5楼
2019-11-20 08:09   回复  
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nono200913楼
2019-11-22 15:38   回复  
shishui66(金币+1): 谢谢参与
·
BiotageAB14楼
2019-11-22 20:09   回复  
shishui66(金币+1): 谢谢参与
sz_kebaoyuan15楼
2019-11-22 21:06   回复  
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psylhh16楼
2019-11-22 21:18   回复  
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醉酒客17楼
2019-11-23 10:23   回复  
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Fpbear18楼
2019-12-12 08:26   回复  
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