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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 如何选择内参抗体
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shishui66

铜虫 (小有名气)

[交流] 如何选择内参抗体

本人准备做WB实验，要做三个抗体，一个是细胞核蛋白，一个是细胞质蛋白，一个是细胞膜蛋白，可以用同一个内参蛋白β-actin吗？哪家公司的内参蛋白抗体比较好用？
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菁华浮梦77

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1楼2019-11-19 15:51:22
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13297913532

新虫 (正式写手)
细胞质蛋白有多种可以选择,GAPDH 36KDa，肌动蛋白（β-Actin）42 kDa，α-tubulin和β-tubulin分子量分别为55kDa和50kDa，其实际检测条带均在55kDa左右。β-tubulin的蛋白水平通常不会发生改变。

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9楼2019-11-21 21:12:49
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菁华浮梦77

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
选择内参要考虑目的蛋白分子量，通常要保证目的蛋白和内参蛋白分子相差5kd以上，比如检测目的蛋白分子量45kd，就不适宜选择β-actin（42kd）作为内参，可以考虑GAPDH(36kd)。
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2楼2019-11-19 16:04:16
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ELISA_小雷

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 菁华浮梦77 at 2019-11-19 16:04:16
选择内参要考虑目的蛋白分子量，通常要保证目的蛋白和内参蛋白分子相差5kd以上，比如检测目的蛋白分子量45kd，就不适宜选择β-actin（42kd）作为内参，可以考虑GAPDH(36kd)。

感谢楼上的提醒，差点忘记考虑分子量问题。
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3楼2019-11-19 16:12:58
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13297913532

新虫 (正式写手)
★
shishui66(金币+1): 谢谢参与
三种不同亚定位的蛋白需要用到三种不同的内参

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6楼2019-11-21 21:06:35
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