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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 如何选择内参抗体
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shishui66

铜虫 (小有名气)

[交流] 如何选择内参抗体

本人准备做WB实验，要做三个抗体，一个是细胞核蛋白，一个是细胞质蛋白，一个是细胞膜蛋白，可以用同一个内参蛋白β-actin吗？哪家公司的内参蛋白抗体比较好用？
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菁华浮梦77

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1楼2019-11-19 15:51:22
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13297913532

新虫 (正式写手)
建议如下：细胞核蛋白一般有两种选择：常用的为Histone-H3,组蛋白Histone H3.1由于是染色体的组成型表达组分，表达比较稳定，经常被作为最广泛的核内参使用。目标蛋白15kd左右，。另外一种是增殖细胞核抗原（PCNA），PCNA即增殖细胞核抗原，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名，以后的研究发现PCNA与细胞DNA合成关系密切，在细胞增殖的启动上起重要作用，是反映细胞增殖状态的良好指标。在细胞核内合成，并存在于细胞核内，其由261个氨基酸组成，分子量为36KD。

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7楼2019-11-21 21:06:50
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菁华浮梦77

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
选择内参要考虑目的蛋白分子量，通常要保证目的蛋白和内参蛋白分子相差5kd以上，比如检测目的蛋白分子量45kd，就不适宜选择β-actin（42kd）作为内参，可以考虑GAPDH(36kd)。
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2楼2019-11-19 16:04:16
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ELISA_小雷

捐助贵宾 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 菁华浮梦77 at 2019-11-19 16:04:16
选择内参要考虑目的蛋白分子量，通常要保证目的蛋白和内参蛋白分子相差5kd以上，比如检测目的蛋白分子量45kd，就不适宜选择β-actin（42kd）作为内参，可以考虑GAPDH(36kd)。

感谢楼上的提醒，差点忘记考虑分子量问题。
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3楼2019-11-19 16:12:58
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13297913532

新虫 (正式写手)
★
shishui66(金币+1): 谢谢参与
三种不同亚定位的蛋白需要用到三种不同的内参

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6楼2019-11-21 21:06:35
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