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jiajiawuwsw银虫 (小有名气)
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[交流]
提到的DNA总降解是怎么回事
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我做的是醋酸菌，G-，最近提到的DNA降解特别严重，电泳结果有时候全部是弥散，看不到主带。 我用的方法如下： 收集菌体，加Saline-EDTA buffer(pH8.0), 1. Lysozyme+RNase, 37度,30min； 2.ProteinaseK, 37度，1h; 3.10uL25% SDS， 水浴65度，10min; 4.CTAB, 醋酸钠buffer； 5.氯仿：异戊醇（24：1）抽提两次； 6.冷乙醇沉淀； 7.70%乙醇洗涤一次； 8.干燥，nucleic acid -free water 溶解。 通常在冷乙醇沉淀离心后可以看到明显的白色沉淀，Nano-drop结果也很高，但是电泳结果却是弥散的带。过去，我一直在用这个方法，但最近总是拿不到DNA，酶和试剂也都换了一遍，结果还是不行。 可能我有些重要的细节没有注意好，请各位不吝赐教！ |
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