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jiajiawuwsw银虫 (小有名气)
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[交流]
提到的DNA总降解是怎么回事
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我做的是醋酸菌,G-,最近提到的DNA降解特别严重,电泳结果有时候全部是弥散,看不到主带。 我用的方法如下: 收集菌体,加Saline-EDTA buffer(pH8.0), 1. Lysozyme+RNase, 37度,30min; 2.ProteinaseK, 37度,1h; 3.10uL25% SDS, 水浴65度,10min; 4.CTAB, 醋酸钠buffer; 5.氯仿:异戊醇(24:1)抽提两次; 6.冷乙醇沉淀; 7.70%乙醇洗涤一次; 8.干燥,nucleic acid -free water 溶解。 通常在冷乙醇沉淀离心后可以看到明显的白色沉淀,Nano-drop结果也很高,但是电泳结果却是弥散的带。过去,我一直在用这个方法,但最近总是拿不到DNA,酶和试剂也都换了一遍,结果还是不行。 可能我有些重要的细节没有注意好,请各位不吝赐教! |
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5楼2009-06-04 15:10:50
wjswj
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2楼2009-06-04 10:22:52
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