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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 提到的DNA总降解是怎么回事
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
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按照常理来讲一般RNA是会降解的，DNA降解的可能性比较小。
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11楼2009-06-08 13:09:33
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yierangel

金虫 (小有名气)
检查一下溶解DNA的buffer 的pH是否低于8.0，理论上DNA在pH<8.0时很容易降解。
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12楼2009-06-08 18:37:53
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stfo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
难道是硫修饰？？？？

看看邓院士的文章吧
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13楼2009-06-08 21:35:37
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林祎

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
RNA酶有问题吗？操作时剪切力可能有影响
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14楼2009-06-09 10:30:49
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是操作太剧烈了？机械性降解DNA？
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15楼2009-06-09 12:46:53
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jiajiawuwsw

银虫 (小有名气)

再次求助--好像还是有降解,是不是胶有问题?

按照大家给的提示更改了一些步骤,效果还是不太好. 不知道是不是在提取前就降解了.
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世界依然美好，值得为之奋斗！
16楼2009-06-10 16:37:02
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jiajiawuwsw

银虫 (小有名气)
160rpm摇菌60h, 12000rpm,5min 离心收集菌体。
加Saline-EDTA buffer(pH8.0)500ul 悬浮菌体。
1. Lysozyme（10ug/uL, 10ul）, 37度,30min；
2.ProteinaseK, 55度，20min;(这步操作之后，有些tube中的solution是透明的，另外一些tube还是浑浊的)
3.40uL25% SDS， 水浴65度，10min;
4.2%CTAB100ul（预热到65度）, 5M醋酸钠buffer180ul；mix 10min(动作很轻柔)
5.10000rpm离心十分钟；
6.氯仿：异戊醇（24：1）抽提两次（中间白色夹层特别容易被吸起，很难去除，最后选择放弃一部分水相）；
7.2倍体积冷乙醇沉淀（加入冷乙醇后可以看到絮状沉淀，但有些样品中有小气泡，可能和加入乙醇时用力过猛有关？）；
8.10000rpm离心十分钟，离心管底部白色沉淀肉眼可见；
9.70%乙醇洗涤一次；
8.室温自然干燥，得到透明或淡黄色物质，适量的nucleic acid -free water 溶解（上次操作该用pH8.0TE了）。
以上是我修改后的步骤，还是不清楚问题出在哪里。
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世界依然美好，值得为之奋斗！
17楼2009-06-10 16:57:59
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