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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 切胶回收浓度低
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shier-

新虫 (小有名气)

[求助] 切胶回收浓度低 已有1人参与

PCR跑胶之后条带很亮，但是切胶回收浓度只有20+，求解决方案!谢谢各位!
我是制的大孔的，50ul全部点进一个孔，同基因点三个，切进一管，最后回收，加的25的elution buffer。

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1楼 2019-05-26 18:14:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

眺望爱

铜虫 (初入文坛)
浓度低?20还行吧，主要看柱子，一般c柱回收也就6成不到。片段小的话需要加异丙醇哦。一管回收会有溶解不完全或者堵塞的情况，导致浓度变低，最好多加点溶胶液，确保融好。elut或者水可以提前加热一下50度。这样也会提高回收效率。

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目标：生物的星辰大海！！！！
9楼2019-05-30 13:38:02
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普通回帖

xiaodengxin

金虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-05-26 22:41:03
没关系，直接做。或者下次换pcr 纯化kit

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2楼2019-05-26 19:48:15
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-05-28 22:28:21
你把电泳图贴上来看看，如果电泳图无明显杂带，直接用PCR产物回收试剂盒回收好了，既快效果又好。
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3楼2019-05-27 18:58:50
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请回答2019

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2019-05-28 19:57:16
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shier-

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaodengxin at 2019-05-26 19:48:15
没关系，直接做。或者下次换pcr 纯化kit

有多条带，有的基因还有二聚体好像只能切胶回收吧

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5楼2019-05-28 21:28:37
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shier-

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2019-05-27 18:58:50
你把电泳图贴上来看看，如果电泳图无明显杂带，直接用PCR产物回收试剂盒回收好了，既快效果又好。

有二聚体呢，有的基因有多条带

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6楼2019-05-28 21:29:10
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shier-

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 请回答2019 at 2019-05-28 19:57:16
楼主是做dna吗

不是呢是克隆

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7楼2019-05-28 21:29:31
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竹园隐士

新虫 (初入文坛)
上个图看看，也可以换个试剂看看

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8楼2019-05-29 15:51:31
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by shier- at 2019-05-28 21:29:10
有二聚体呢，有的基因有多条带
...

在做PCR产物回收时，二聚体很小，基本结合不到回收柱的膜上。如果有的基因有多条带，换引物，用好一点的酶。切胶回收损失是很大。有多条带，而杂带在重新设计引物又无法去除时，加增加扩增的PCR管数（例如50微升一个体系，做10管）。
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10楼2019-05-30 15:43:39
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