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Western blot 转膜使用甲醇问题求教 已有2人参与
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Western blot转膜液里为什么要加20%甲醇？？我搜索并得到以下解释，但不确定是否正确： 1、甲醇可以可以减少电流，从而降低产热。 疑问：直接设置更低的转膜电压不就可以了，何必加甲醇。 2、甲醇可以去除蛋白上的SDS 疑问：SDS去除了如何保证蛋白向正极移动。 3、不加甲醇蛋白转不上膜 疑问：这个说法的原理是什么？我曾用过购买的10× 转膜液， 直接用水稀释即可使用，蛋白完全能顺利转上膜，之后也blot出了条带。 |
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2楼2019-04-12 08:44:57
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5楼2019-04-12 16:02:45
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我找到了其他课题组也用乙醇代替的回答。 我觉得降低电导防止过热没有必要用甲醇，毕竟太毒了，不划算，开始使就用冰的buffer，设置更小的电压就行了。 也有人表示转膜不用甲醇是可以的（活化的时候还是要的）。加了甲醇有利于蛋白分子更好的结合到膜上，等等。以下连接给你参考： https://www.researchgate.net/pos ... the_transfer_buffer |
6楼2019-04-12 19:37:02
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以下是我找到的答案，供大家参考。 https://www.researchgate.net/pos ... the_transfer_buffer 结论是：加了甲醇有利于蛋白的固定到膜上，特别是小分子的蛋白，对于大分子的蛋白可能是不利的，乙醇可以代替甲醇使用。 Thermo fisher官网的说明： Methanol in the transfer buffer aids in stripping the SDS from proteins in SDS-PAGE gels, increasing their ability to bind to support membranes. However, methanol can inactivate enzymes required for downstream analyses, and it can shrink the gel and membrane, which may increase the transfer time of large molecular weight proteins (150,000 Da) with poor solubility in methanol. In the absence of methanol, though, protein gels may swell in low ionic strength buffers, and therefore it is recommended to pre-swell gels for 30 minutes to 1 hour to prevent band distortion. |
7楼2019-04-12 19:41:58
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