应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » Western blot 转膜使用甲醇问题求教
51/1返回列表
查看: 23386  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

一个不小心就

金虫 (正式写手)

[求助] Western blot 转膜使用甲醇问题求教 已有2人参与

Western blot转膜液里为什么要加20%甲醇？？我搜索并得到以下解释，但不确定是否正确：

1、甲醇可以可以减少电流，从而降低产热。
     疑问：直接设置更低的转膜电压不就可以了，何必加甲醇。

2、甲醇可以去除蛋白上的SDS
      疑问：SDS去除了如何保证蛋白向正极移动。

3、不加甲醇蛋白转不上膜
      疑问：这个说法的原理是什么？我曾用过购买的10× 转膜液， 直接用水稀释即可使用，蛋白完全能顺利转上膜，之后也blot出了条带。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-04-11 16:36:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

123BIOCAT

铁虫 (著名写手)
我们一般用无水乙醇

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2019-06-10 12:31:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

lirol

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
（从别处粘来的，觉得这个解释更合理些，由于甲醇有一定的毒性，我们是用的乙醇，使用效果也不错。）PVDF膜一定要在纯甲醇里浸润的！不然蛋白结合不上去。在100%甲醇里短暂浸润,其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合。小分子及大分子量的蛋白转移时，多加或不加甲醇也是这个目的。因为小分子不容易和膜结合而大分子更容易。转膜的过程，是一个恒定电场下，电荷转移的过程。这个过程中，蛋白的转移和电场强度以及自身电荷有关。你加入的甲醇主要是降低电导的作用。防止你的溶液过热。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2019-04-12 08:44:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下
3楼2019-04-12 08:54:57
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lirol at 2019-04-12 08:44:57
（从别处粘来的，觉得这个解释更合理些，由于甲醇有一定的毒性，我们是用的乙醇，使用效果也不错。）PVDF膜一定要在纯甲醇里浸润的！不然蛋白结合不上去。在100%甲醇里短暂浸润,其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基 ...

你们用乙醇的比例是多少？活化的时候也用乙醇吗？
转膜过程中也要加甲醇，难道说活化以后的膜还会去活化？
赞一下 回复此楼
4楼2019-04-12 15:46:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0817化学工程与技术312分求调剂 +6 T123 tt 2026-03-04 6/300 2026-03-07 17:37 by 无际的草原
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4 +3 7mzg0e04z2 2026-03-06 5/250 2026-03-07 17:20 by i6un4pi8fv
[教师之家] 售SCI文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4 +3 7mzg0e04z2 2026-03-06 4/200 2026-03-07 17:10 by i6un4pi8fv
[考研] 调剂的同学，走过路过，不要错过 +5 likeihood 2026-03-06 9/450 2026-03-07 15:59 by 酸菜不吃鱼
[考研] 288求调剂085600材料与化工 +7 Daunrin 2026-03-07 8/400 2026-03-07 15:50 by xuesongli73
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学0856材料与化工，前三科206，总分283，求调剂 +7 26考研求调剂 2026-03-06 7/350 2026-03-07 14:49 by Miko19
[考博] 售渎SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。备注【⊙=0】 +3 vs9ky3szrj 2026-03-06 3/150 2026-03-07 12:12 by 68vlfw6g5q
[找工作] 售渎SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。备注【⊙=0】 +4 ipys00zm58 2026-03-06 7/350 2026-03-07 11:42 by 68vlfw6g5q
[考研] 材料专硕290求调剂 +8 杰尼龟aaa 2026-03-04 8/400 2026-03-06 16:06 by @飒飒飒飒
[考研] 085600材料与化工，一志愿广州985，求调剂 +10 qqyyaill 2026-03-05 10/500 2026-03-06 15:58 by 聪明的大松鼠
[考博] 26申博-目前4篇SCI一作 +4 chen_2024 2026-03-02 4/200 2026-03-05 22:59 by sicilyl0001
[考研] 中国科学技术大学材料与化工281求调剂，有科研和获奖经历 +11 wsxw 2026-03-02 12/600 2026-03-05 09:49 by oxidpl
[考研] 调剂材料学硕 +6 词凝Y 2026-03-02 6/300 2026-03-05 07:10 by 昆工985
[考研] 320材料与化工，求调剂 +6 鹤遨予卿 2026-03-04 8/400 2026-03-04 20:47 by wutongshun
[考研] 0703化学求调剂 +3 将未有期 2026-03-04 3/150 2026-03-04 16:19 by sslc1985
[考研] 武理材料工程302调剂 +3 Doleres 2026-03-03 6/300 2026-03-04 15:54 by zhukairuo
[考研] 化工专硕调剂 +4 利好利好. 2026-03-03 7/350 2026-03-03 21:30 by L135790
[考研] 291求调剂 +3 MuoLuo1312 2026-03-02 6/300 2026-03-03 12:13 by 热情沙漠
[考研] 338求调剂 +5 18162027187 2026-03-02 6/300 2026-03-03 07:52 by njzyff
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭