应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » Western blot 转膜使用甲醇问题求教
51/1返回列表
查看: 24214  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

一个不小心就

金虫 (正式写手)

[求助] Western blot 转膜使用甲醇问题求教 已有2人参与

Western blot转膜液里为什么要加20%甲醇？？我搜索并得到以下解释，但不确定是否正确：

1、甲醇可以可以减少电流，从而降低产热。
     疑问：直接设置更低的转膜电压不就可以了，何必加甲醇。

2、甲醇可以去除蛋白上的SDS
      疑问：SDS去除了如何保证蛋白向正极移动。

3、不加甲醇蛋白转不上膜
      疑问：这个说法的原理是什么？我曾用过购买的10× 转膜液， 直接用水稀释即可使用，蛋白完全能顺利转上膜，之后也blot出了条带。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-04-11 16:36:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lirol

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 一个不小心就 at 2019-04-12 15:46:32
你们用乙醇的比例是多少？活化的时候也用乙醇吗？
转膜过程中也要加甲醇，难道说活化以后的膜还会去活化？...

我们是用甲醇的地方都改成乙醇了，比例一样的。转膜过程中的甲醇主要是降低电导，防止过热？无论是湿转还是半干转都要注意电流的变化，你可以试试看加不加甲醇电流的差别。
赞一下 回复此楼
5楼2019-04-12 16:02:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

lirol

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
（从别处粘来的，觉得这个解释更合理些，由于甲醇有一定的毒性，我们是用的乙醇，使用效果也不错。）PVDF膜一定要在纯甲醇里浸润的！不然蛋白结合不上去。在100%甲醇里短暂浸润,其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合。小分子及大分子量的蛋白转移时，多加或不加甲醇也是这个目的。因为小分子不容易和膜结合而大分子更容易。转膜的过程，是一个恒定电场下，电荷转移的过程。这个过程中，蛋白的转移和电场强度以及自身电荷有关。你加入的甲醇主要是降低电导的作用。防止你的溶液过热。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2019-04-12 08:44:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下
3楼2019-04-12 08:54:57
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

一个不小心就

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lirol at 2019-04-12 08:44:57
（从别处粘来的，觉得这个解释更合理些，由于甲醇有一定的毒性，我们是用的乙醇，使用效果也不错。）PVDF膜一定要在纯甲醇里浸润的！不然蛋白结合不上去。在100%甲醇里短暂浸润,其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基 ...

你们用乙醇的比例是多少？活化的时候也用乙醇吗？
转膜过程中也要加甲醇，难道说活化以后的膜还会去活化？
赞一下 回复此楼
4楼2019-04-12 15:46:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[找工作] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +5 哈哈114477 2026-08-01 5/250 2026-08-08 15:14 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读？ +9 Tide man 2026-08-08 17/850 2026-08-08 14:56 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:42 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +5 a089 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:04 by alian_214
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭