24小时热门版块排行榜    

查看: 1618  |  回复: 4

bonnieqian

新虫 (初入文坛)

[交流] 慢病毒转染法制作稳定细胞株 已有3人参与

您好,我最近在做病毒转染相关的实验,是将一些细胞因子(如,人的ceacam,CD4,CD38,CD47等)通过慢病毒系统转染293T,使细胞因子表达在293T细胞的表面,其它都很顺利拿到了单克隆,并且验证正确,只有ceacam做了几次都没拿到正确的克隆,减小药筛浓度也没有用,加药就死的差不多了,幸免活下来的也是检测阴性的,我思考到下面几个原因,但是又都有疑惑,请大神帮我分析一下!非常感谢!
1 基因本身没有转进去,但 293T本身并不是很难转染的细胞,并且重复了几次了
2 基因转进去了,但是表达产物会使细胞死亡 ,这种情况有什么样的思路可以解决
3 基因表达了,但是没有到细胞表面,所以检测不到,呈现阴性结果,可是与它几个细胞因子一样,我加了同样的信号肽,为什么其他的出来了,困惑
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

追求梦的人

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-02-19 22:35:31
是不是你的这个在进行病毒包装的时候没包装好

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

艰难困苦玉汝于成
2楼2019-02-19 14:31:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bonnieqian

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 追求梦的人 at 2019-02-19 14:31:14
是不是你的这个在进行病毒包装的时候没包装好

重复了几次了,不过也有这种可能,我没有测病毒滴度,但是其它的分子也是同时包装的,基本上一次都能拿到克隆,只有这个难搞,有什么建议吗?比如包装过程应该注意什么,您有什么经验分享一下呗,我再重新包装一次,非常感谢您的回复!
3楼2019-02-20 11:03:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1437295036

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
转完后检测一下这个基因的表达情况

发自小木虫Android客户端
4楼2019-04-23 21:59:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

灰色风暴

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
使用的那种信号肽
过好每一天
5楼2019-08-14 10:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bonnieqian 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +3 Promise-jyl 2026-03-23 3/150 2026-03-23 13:43 by wangkm
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-17 10/500 2026-03-23 13:05 by 醉在风里
[考研] 336化工调剂 +3 王大坦1 2026-03-23 4/200 2026-03-23 11:07 by laoshidan
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 一志愿070300浙大化学358分,求调剂! +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 初始318分求调剂(有工作经验) +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大,求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂(0854都可以) +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
信息提示
请填处理意见