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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 慢病毒转染法制作稳定细胞株
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bonnieqian

新虫 (初入文坛)

[交流] 慢病毒转染法制作稳定细胞株 已有3人参与

您好，我最近在做病毒转染相关的实验，是将一些细胞因子（如，人的ceacam，CD4，CD38，CD47等）通过慢病毒系统转染293T，使细胞因子表达在293T细胞的表面，其它都很顺利拿到了单克隆，并且验证正确，只有ceacam做了几次都没拿到正确的克隆，减小药筛浓度也没有用，加药就死的差不多了，幸免活下来的也是检测阴性的，我思考到下面几个原因，但是又都有疑惑，请大神帮我分析一下！非常感谢！
1 基因本身没有转进去，但 293T本身并不是很难转染的细胞，并且重复了几次了
2 基因转进去了，但是表达产物会使细胞死亡 ，这种情况有什么样的思路可以解决
3 基因表达了，但是没有到细胞表面，所以检测不到，呈现阴性结果，可是与它几个细胞因子一样，我加了同样的信号肽，为什么其他的出来了，困惑
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1楼 2019-02-14 17:39:53
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灰色风暴

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
使用的那种信号肽
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过好每一天
5楼2019-08-14 10:46:51
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追求梦的人

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-02-19 22:35:31
是不是你的这个在进行病毒包装的时候没包装好
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bonnieqian
艰难困苦玉汝于成
2楼2019-02-19 14:31:14
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bonnieqian

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 追求梦的人 at 2019-02-19 14:31:14
是不是你的这个在进行病毒包装的时候没包装好

重复了几次了，不过也有这种可能，我没有测病毒滴度，但是其它的分子也是同时包装的，基本上一次都能拿到克隆，只有这个难搞，有什么建议吗？比如包装过程应该注意什么，您有什么经验分享一下呗，我再重新包装一次，非常感谢您的回复！
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3楼2019-02-20 11:03:36
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1437295036

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转完后检测一下这个基因的表达情况

发自小木虫Android客户端
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4楼2019-04-23 21:59:36
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