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bonnieqian

新虫 (初入文坛)

[交流] 慢病毒转染法制作稳定细胞株 已有3人参与

您好,我最近在做病毒转染相关的实验,是将一些细胞因子(如,人的ceacam,CD4,CD38,CD47等)通过慢病毒系统转染293T,使细胞因子表达在293T细胞的表面,其它都很顺利拿到了单克隆,并且验证正确,只有ceacam做了几次都没拿到正确的克隆,减小药筛浓度也没有用,加药就死的差不多了,幸免活下来的也是检测阴性的,我思考到下面几个原因,但是又都有疑惑,请大神帮我分析一下!非常感谢!
1 基因本身没有转进去,但 293T本身并不是很难转染的细胞,并且重复了几次了
2 基因转进去了,但是表达产物会使细胞死亡 ,这种情况有什么样的思路可以解决
3 基因表达了,但是没有到细胞表面,所以检测不到,呈现阴性结果,可是与它几个细胞因子一样,我加了同样的信号肽,为什么其他的出来了,困惑
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1437295036

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
转完后检测一下这个基因的表达情况

发自小木虫Android客户端
4楼2019-04-23 21:59:36
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追求梦的人

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-02-19 22:35:31
是不是你的这个在进行病毒包装的时候没包装好

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艰难困苦玉汝于成
2楼2019-02-19 14:31:14
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bonnieqian

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 追求梦的人 at 2019-02-19 14:31:14
是不是你的这个在进行病毒包装的时候没包装好

重复了几次了,不过也有这种可能,我没有测病毒滴度,但是其它的分子也是同时包装的,基本上一次都能拿到克隆,只有这个难搞,有什么建议吗?比如包装过程应该注意什么,您有什么经验分享一下呗,我再重新包装一次,非常感谢您的回复!
3楼2019-02-20 11:03:36
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灰色风暴

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
使用的那种信号肽
过好每一天
5楼2019-08-14 10:46:51
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