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郭高杰

新虫 (正式写手)

[交流] 蛋白表达

在用大肠Rosetta表达，载体pet-28a,表达里氏木霉来源的swollenin蛋白，20度，0.1mM IPTG诱导，收集菌体后，超声破碎，跑蛋白胶，发现生成的是包涵体，请问接下来应该怎么变性复性，得到有活性的蛋白？
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young1983

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1楼 2019-01-14 21:13:39
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★ ★
郭高杰(金币+1): 谢谢参与
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2019-01-15 06:42:22
先不要着急复性包涵体，建议换个载体试试，说不定就是可溶蛋白了

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2楼2019-01-14 21:15:56
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郭高杰

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2019-01-14 21:15:56
先不要着急复性包涵体，建议换个载体试试，说不定就是可溶蛋白了

大肠表达真核细胞来源的蛋白，很容易形成包涵体，想着接着往下做，有什么好方法吗？

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4楼2019-01-14 21:21:46
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2011sp

铁杆木虫 (著名写手)
★
郭高杰(金币+1): 谢谢参与
你4度诱导试试

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15楼2019-01-15 08:45:13
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young1983

木虫 (正式写手)
★
郭高杰(金币+1): 谢谢参与
送红花一朵
芽孢杆菌分泌的真核来源的重组蛋白具有天然构象和生物活性，避免形成包涵体；表达周期短，蛋白产率高，可以分泌到细胞外。

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17楼2019-01-15 10:13:19
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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)
★
郭高杰(金币+1): 谢谢参与
我一般16度表达，同时也可以使用酵母系统试一下解决包涵体问题。
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18楼2019-01-15 10:32:56
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匿名


★
郭高杰(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
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19楼2019-01-15 11:53:30
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郭高杰

新虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 立林258369 at 2019-01-15 11:53:30
可以尝试真核表达，例如酵母表达

用毕赤酵母表达，可是九月份表达出来过，在之后重复不出来了

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20楼2019-01-15 14:36:07
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假大空

木虫之王 (文学泰斗)
★
郭高杰(金币+1): 谢谢参与
好运
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27楼2019-01-20 09:36:01
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实验white

新虫 (初入文坛)
★
郭高杰(金币+1): 谢谢参与
你可以试着再改变下诱导温度，如果还是没有活性，那就只能复性了。

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28楼2019-01-21 00:00:22
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迭芳芳儿

银虫 (正式写手)
★
郭高杰(金币+1): 谢谢参与
尿素溶解

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29楼2019-03-09 10:56:14
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昔归@&

新虫 (正式写手)
换个载体

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30楼2020-04-01 10:00:54
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tjw0824

木虫 (著名写手)
★
郭高杰(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
4楼: Originally posted by 郭高杰 at 2019-01-14 21:21:46
大肠表达真核细胞来源的蛋白，很容易形成包涵体，想着接着往下做，有什么好方法吗？
...

换载体，尝试各种融合标签，包涵体复性不太好做，得率不高

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31楼2020-06-19 07:36:00
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二舅娘12503楼
2019-01-14 21:17   回复  
郭高杰(金币+1): 谢谢参与
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nono20095楼
2019-01-14 21:37   回复  
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·
tzynew6楼
2019-01-14 22:27   回复  
郭高杰(金币+1): 谢谢参与
Biotage7楼
2019-01-14 22:46   回复  
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sz_kebaoyuan8楼
2019-01-14 22:49   回复  
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等闲识得9楼
2019-01-14 23:03   回复  
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slytjiaofei10楼
2019-01-14 23:20   回复  
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guimu11楼
2019-01-14 23:34   回复  
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syhorchid12楼
2019-01-14 23:50   回复  
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xiaoqiuqiu2013楼
2019-01-15 01:16   回复  
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youngen14楼
2019-01-15 06:46   回复  
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gggggguo16楼
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miaojiabing21楼
2019-01-15 15:43   回复  
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紫然若依22楼
2019-01-15 16:03   回复  
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youngen23楼
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