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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酿酒酵母基因敲除的问题
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韩恋希

铜虫 (初入文坛)

[求助] 酿酒酵母基因敲除的问题 已有2人参与

最近在做酿酒酵母一个受体基因的敲除，设计了上游同源臂-潮霉素筛选标记-下游同源臂，总共大概3500个碱基，用KOD扩增后回收产物，醋酸锂转化酿酒酵母，在100ug/ml潮霉素的板子上两天了一个菌都没有，想请教大神哪里出现了问题啊
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1楼 2018-09-27 23:21:48
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ECUST_CAPF

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1. 确保对照全部正常
2. 确保感受态效率足够高
3. 如果没问题，找一个熟练的人 俩人同时操作，排除手法问题
4. 上述3点前提是所用材料均正常，排除了人的原因，那就从材料上找问题

具体信息太少，无法准确判断哪里有问题
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Behind the glory is a loneliness
6楼2020-04-02 08:50:51
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有对照吗？转化后长在没有潮霉素的板子上。排除转化问题。
然后就是效率问题
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2018-09-28 01:29:17
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韩恋希

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-09-28 01:29:17
有对照吗？转化后长在没有潮霉素的板子上。排除转化问题。
然后就是效率问题

转化试剂包括方法都是前几天才用过的，

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3楼2018-09-28 20:17:15
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burma9

新虫 (小有名气)
你好，请问你的实验做出来了吗？用的酵母菌是单倍体还是双倍体啊

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4楼2018-12-20 08:03:48
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