应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】转化问题，急！
141/2返回列表12下一页
查看: 911  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

zijing7391

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】转化问题，急！

新手，最近做转化一直都是什么菌都不长，不知道问题出在哪里，请各位高手帮忙分析一下，前几次一直用买的T载体和买的感受态细胞进行转化，也做了对照，结果什么都不长，最近自己做了感受态细胞，还是什么也不长，抗生素浓度用的是100ug/ml，应该怎么检测感受态细胞是不是好用？怎么才能让它长菌啊，郁闷，请各位高手指点！非常感谢！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-9 at 11:58 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-03-12 14:43:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zl382

铁虫 (小有名气)
把你转化的步骤写上来，如实详细地写
你这么说不知道你问题出在哪里了。
赞一下 回复此楼
后退，绝对是无路可走！
2楼2009-03-12 15:00:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzm7806

★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论，欢迎常来~ 3-13 09:03
检测感受态是否好用，可以转化阳性质粒鉴定。
具体问题出在哪里，还得看到你的转化步骤才知道
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2009-03-13 08:51:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞侠8683

新虫 (小有名气)
同意楼上的说法
回复此楼
4楼2009-03-13 11:21:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)
做一个阳性对照,应该能出来,否则就是感受态的问题
最好把你的步骤写出来,看是不是你的转化过程出错了
赞一下 回复此楼
5楼2009-03-13 13:01:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zijing7391

新虫 (初入文坛)
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论~ 3-18 14:48
转化的具体步骤：
1.将连接产物加入到100Ul的感受态细胞中，冰上放置30min
2.42度水浴60-90s
3.冰上放置1min
4.加入37度预热的培养基890ul
5.37度150转培养45分钟
6.取200UL涂平板，37度过夜培养
这是我的具体过程，做的对照也不长。但是我买的感受态细胞也是这么做的也不长啊，买的感受态也不好用吗？
赞一下(10人) 回复此楼
6楼2009-03-17 22:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
没连上……
你转一个环化的质粒看看
赞一下 回复此楼
7楼2009-03-18 00:00:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

石头1798

新虫 (初入文坛)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~3Q~ 3-18 14:49
wo的具体步骤：
1.将连接产物加入到500Ul的感受态细胞中，冰上放置30min
2.42度水浴60-90s
3.冰上放置1min
4.加入37度预热的培养基800ul
5.37度150转培养60分钟
6.4200rpm离心10分钟
7.吸上清800弃掉，剩下吹散后涂板，37度过夜培养

请作参考！
赞一下(10人) 回复此楼
8楼2009-03-18 08:46:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiangfeng

金虫 (小有名气)

我的转化步骤

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):鼓励新虫~ 3-18 14:49
（1）从-70℃冰箱中取出大肠杆菌DH5α感受态，置冰上备用;
（2）取连接产物5 μL加入到200 μL大肠杆菌DH5α感受态中混匀,冰上放置30min；
（3）42℃水浴热击90sec，期间不要晃动EPP管，热击结束后立刻放冰上5min；
（4）在EPP管中加入800μL不含抗生素的LB培养基，37℃230-250rpm震荡培养1小时；
（5）8000rpm离心2min，弃上清，留下60-100μL涂板；
（6）将剩余转化液均匀涂布在含有Amp抗性的LB平板上，用Parafilm封口，
37℃在恒温箱中倒置培养12-16 h或过夜培养。

注：我们用的抗生素浓度一般为：
Kan初浓度为 50mg/ml或100mg/ml
Amp初浓度为 50mg/ml或100mg/ml

个人感觉：我认为转化成功与否，关键是感受态质量的好坏，如果感受态质量好的话，转化一般没问题。
赞一下(10人) 回复此楼
顺势而行，问心无愧！
9楼2009-03-18 12:21:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔红利

新虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~ 3-18 14:50
我本人认为你的转化步骤中的第五步有点问题啊，活化的时候刚开始应该转速调低一点，可以参考：50转每分钟，15分钟    100转每分钟  15分钟    150转每分钟   20分钟    然后5000转每分钟离心3分钟   剩余150微升左右进行涂板。
赞一下(10人) 回复此楼
10楼2009-03-18 13:00:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zijing7391 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 寻找调剂 +5 倔强芒? 2026-03-21 8/400 2026-03-26 13:25 by 0906ljy
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 材料学硕333求调剂 +4 北道巷 2026-03-24 4/200 2026-03-25 14:16 by mapenggao
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭