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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】转化问题，急！
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zijing7391

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】转化问题，急！

新手，最近做转化一直都是什么菌都不长，不知道问题出在哪里，请各位高手帮忙分析一下，前几次一直用买的T载体和买的感受态细胞进行转化，也做了对照，结果什么都不长，最近自己做了感受态细胞，还是什么也不长，抗生素浓度用的是100ug/ml，应该怎么检测感受态细胞是不是好用？怎么才能让它长菌啊，郁闷，请各位高手指点！非常感谢！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-9 at 11:58 ]
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1楼 2009-03-12 14:43:04
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
做一个阳性对照,应该能出来,否则就是感受态的问题
最好把你的步骤写出来,看是不是你的转化过程出错了
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5楼2009-03-13 13:01:18
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zl382

铁虫 (小有名气)
把你转化的步骤写上来，如实详细地写
你这么说不知道你问题出在哪里了。
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后退，绝对是无路可走！
2楼2009-03-12 15:00:46
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zzm7806

★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论，欢迎常来~ 3-13 09:03
检测感受态是否好用，可以转化阳性质粒鉴定。
具体问题出在哪里，还得看到你的转化步骤才知道
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3楼2009-03-13 08:51:30
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zijing7391

新虫 (初入文坛)
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论~ 3-18 14:48
转化的具体步骤：
1.将连接产物加入到100Ul的感受态细胞中，冰上放置30min
2.42度水浴60-90s
3.冰上放置1min
4.加入37度预热的培养基890ul
5.37度150转培养45分钟
6.取200UL涂平板，37度过夜培养
这是我的具体过程，做的对照也不长。但是我买的感受态细胞也是这么做的也不长啊，买的感受态也不好用吗？
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6楼2009-03-17 22:21:53
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