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修晓飞

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教各位老师,无缝连接的几个问题,谢谢已有2人参与

1.无缝连接中的片段和摩尔比是什么意思?怎样算?
2.无缝连接哪家的试剂盒比较好?
3.连接后转化DH5α中,有什么片段长度限制吗?
谢谢各位大神指点迷津

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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铁心考研

银虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-22 08:25:22
什么叫无缝连接?你是说T4 ligase催化的酶联反应吗?摩尔比指的是载体和片段的摩尔比,算法简单,说起来比较复杂,你就按照摩尔质量计算,核酸的平均相对分子质量用字母替代,后面就约掉了,但是要知道载体和片段的碱基数。

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我热爱自然科学!
2楼2018-01-21 22:05:31
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-22 08:25:34
1,摩尔比是有一个公式计算的,根据无缝克隆试剂盒知识的计算即可。2,像大公司的比如takara,天根都行,其中擎科生物技术公司产的相对性价比高,后续服务也可以。3,你在买之前可以咨询一下他们连接的片段长度问题。

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3楼2018-01-21 22:32:47
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

引用回帖:
2楼: Originally posted by 铁心考研 at 2018-01-21 22:05:31
什么叫无缝连接?你是说T4 ligase催化的酶联反应吗?摩尔比指的是载体和片段的摩尔比,算法简单,说起来比较复杂,你就按照摩尔质量计算,核酸的平均相对分子质量用字母替代,后面就约掉了,但是要知道载体和片段的 ...

他说的无缝克隆是Gibson组装

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4楼2018-01-21 22:33:38
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aishida

禁虫 (职业作家)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-22 08:25:49
本帖内容被屏蔽

5楼2018-01-21 22:35:32
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修晓飞

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 铁心考研 at 2018-01-21 22:05:31
什么叫无缝连接?你是说T4 ligase催化的酶联反应吗?摩尔比指的是载体和片段的摩尔比,算法简单,说起来比较复杂,你就按照摩尔质量计算,核酸的平均相对分子质量用字母替代,后面就约掉了,但是要知道载体和片段的 ...

是无缝克隆,买的NEB家的,谢谢您

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6楼2018-01-22 10:13:29
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修晓飞

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by aishida at 2018-01-21 22:35:32
无缝连接用的比较多的是gibison assembly;摩尔数就是质量/(碱基对*650),比值你算一下就好了

做NEB的时候需要注意什么吗?老师

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7楼2018-01-22 10:14:28
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修晓飞

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-01-21 22:32:47
1,摩尔比是有一个公式计算的,根据无缝克隆试剂盒知识的计算即可。2,像大公司的比如takara,天根都行,其中擎科生物技术公司产的相对性价比高,后续服务也可以。3,你在买之前可以咨询一下他们连接的片段长度问题 ...

用的NEB家的,感觉效果一般,可能也是我操作的问题……

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8楼2018-01-22 10:15:17
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15623507725

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们都是用的NEB公司的。一般同源臂的长度我们都是取20bp。
9楼2018-03-19 15:59:17
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新虫 (初入文坛)

你说的就是同源重组呗,诺维赞的不错,是有摩尔比的哦

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10楼2018-03-20 19:41:59
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