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修晓飞

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教各位老师，无缝连接的几个问题，谢谢 已有2人参与

1.无缝连接中的片段和摩尔比是什么意思？怎样算？
2.无缝连接哪家的试剂盒比较好？
3.连接后转化DH5α中，有什么片段长度限制吗？
谢谢各位大神指点迷津

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2018-01-21 21:45:33
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铁心考研

银虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-22 08:25:22
什么叫无缝连接？你是说T4 ligase催化的酶联反应吗？摩尔比指的是载体和片段的摩尔比，算法简单，说起来比较复杂，你就按照摩尔质量计算，核酸的平均相对分子质量用字母替代，后面就约掉了，但是要知道载体和片段的碱基数。

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我热爱自然科学！
2楼2018-01-21 22:05:31
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-22 08:25:34
1，摩尔比是有一个公式计算的，根据无缝克隆试剂盒知识的计算即可。2，像大公司的比如takara，天根都行，其中擎科生物技术公司产的相对性价比高，后续服务也可以。3，你在买之前可以咨询一下他们连接的片段长度问题。

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3楼2018-01-21 22:32:47
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
引用回帖:
2楼: Originally posted by 铁心考研 at 2018-01-21 22:05:31
什么叫无缝连接？你是说T4 ligase催化的酶联反应吗？摩尔比指的是载体和片段的摩尔比，算法简单，说起来比较复杂，你就按照摩尔质量计算，核酸的平均相对分子质量用字母替代，后面就约掉了，但是要知道载体和片段的 ...

他说的无缝克隆是Gibson组装

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4楼2018-01-21 22:33:38
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aishida

禁虫 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-22 08:25:49
本帖内容被屏蔽
5楼2018-01-21 22:35:32
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修晓飞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 铁心考研 at 2018-01-21 22:05:31
什么叫无缝连接？你是说T4 ligase催化的酶联反应吗？摩尔比指的是载体和片段的摩尔比，算法简单，说起来比较复杂，你就按照摩尔质量计算，核酸的平均相对分子质量用字母替代，后面就约掉了，但是要知道载体和片段的 ...

是无缝克隆，买的NEB家的，谢谢您

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6楼2018-01-22 10:13:29
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修晓飞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by aishida at 2018-01-21 22:35:32
无缝连接用的比较多的是gibison assembly；摩尔数就是质量/（碱基对*650），比值你算一下就好了

做NEB的时候需要注意什么吗？老师

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7楼2018-01-22 10:14:28
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修晓飞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-01-21 22:32:47
1，摩尔比是有一个公式计算的，根据无缝克隆试剂盒知识的计算即可。2，像大公司的比如takara，天根都行，其中擎科生物技术公司产的相对性价比高，后续服务也可以。3，你在买之前可以咨询一下他们连接的片段长度问题 ...

用的NEB家的，感觉效果一般，可能也是我操作的问题……

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8楼2018-01-22 10:15:17
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15623507725

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们都是用的NEB公司的。一般同源臂的长度我们都是取20bp。
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9楼2018-03-19 15:59:17
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?hfx86416802

新虫 (初入文坛)
你说的就是同源重组呗，诺维赞的不错，是有摩尔比的哦

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10楼2018-03-20 19:41:59
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