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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » fastapfu和taq酶做菌落pcr
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yuevis

铜虫 (小有名气)

[交流] fastapfu和taq酶做菌落pcr 已有2人参与

之前的片段是用fastpfu，退火温度52扩增的，转化大肠之后，用taq酶做菌落pcr，挑了所有的白色菌落都没有条带，怀疑是退火温度和变性时间的问题，修改之后，变性时间改成5min，退火温度试了55，52都没有条带，请问这是怎么回事啊?如何解决啊，不可能是所有的菌里都没有我的片段吧?

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1楼 2018-01-16 20:48:10
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
★
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有可能，你的基因gc含量过高或者at含量过高

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2楼2018-01-16 21:42:01
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Korea??

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我的转换白菌里到现在为止，已经培养了40个菌株，小提的DNA鉴定，至今没发现我的目的基因

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3楼2018-01-16 21:53:14
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yuevis

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2018-01-16 21:42:01
有可能，你的基因gc含量过高或者at含量过高

有可能是指什么?所有的菌里都没有目的基因吗?还是退火温度的问题?

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4楼2018-01-16 21:55:34
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yuevis

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Korea?? at 2018-01-16 21:53:14
我的转换白菌里到现在为止，已经培养了40个菌株，小提的DNA鉴定，至今没发现我的目的基因

你是直接提的质粒吗?是没提出质粒，还是提的质粒里没有你的目的片段?我想先做菌落pcr再提质粒的，结果总是p不出来

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5楼2018-01-16 21:56:52
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Korea??

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我直接提质粒，但是质粒酶切后没有目的基因。有载体，但目的基因一直没出现过

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6楼2018-01-17 06:45:35
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