24小时热门版块排行榜    

查看: 1014  |  回复: 5

yuevis

铜虫 (小有名气)

[交流] fastapfu和taq酶做菌落pcr 已有2人参与

之前的片段是用fastpfu,退火温度52扩增的,转化大肠之后,用taq酶做菌落pcr,挑了所有的白色菌落都没有条带,怀疑是退火温度和变性时间的问题,修改之后,变性时间改成5min,退火温度试了55,52都没有条带,请问这是怎么回事啊?如何解决啊,不可能是所有的菌里都没有我的片段吧?

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (知名作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有可能,你的基因gc含量过高或者at含量过高

发自小木虫Android客户端
2楼2018-01-16 21:42:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Korea??

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的转换白菌里到现在为止,已经培养了40个菌株,小提的DNA鉴定,至今没发现我的目的基因

发自小木虫IOS客户端
3楼2018-01-16 21:53:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuevis

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2018-01-16 21:42:01
有可能,你的基因gc含量过高或者at含量过高

有可能是指什么?所有的菌里都没有目的基因吗?还是退火温度的问题?

发自小木虫Android客户端
4楼2018-01-16 21:55:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuevis

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Korea?? at 2018-01-16 21:53:14
我的转换白菌里到现在为止,已经培养了40个菌株,小提的DNA鉴定,至今没发现我的目的基因

你是直接提的质粒吗?是没提出质粒,还是提的质粒里没有你的目的片段?我想先做菌落pcr再提质粒的,结果总是p不出来

发自小木虫Android客户端
5楼2018-01-16 21:56:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Korea??

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我直接提质粒,但是质粒酶切后没有目的基因。有载体,但目的基因一直没出现过

发自小木虫IOS客户端
6楼2018-01-17 06:45:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuevis 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 03:31 by xxniao123
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +3 a089 2026-08-26 3/150 2026-08-26 23:21 by young90
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 +4 晴天加油 2026-08-26 5/250 2026-08-26 21:27 by 木风9012
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
请填处理意见