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superdex75纯化蛋白 低盐反而出峰，高盐不出峰 已有7人参与
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大家好，请教一个问题，我在纯化抗体片段，约50KD，杂蛋白120KD，用S75pg这个柱子。现在有一个很奇怪的现象，用20mM Tris+100mM Nacl pH7.42CV都不出峰，在1cv时已出盐峰。换水冲1CV后反而在电导下降时，即缓冲液约换成纯水时出了目的蛋白峰。理论上加了盐应该利于蛋白下来的，为什么现在反而是低盐蛋白下来了。大家对此现象有什么好解释吗？ 发自小木虫IOS客户端 |
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盐溶盐析，可能对于你这个蛋白离子强度低一些更合适吧，可以把氯化钠去掉，再跑一次superdex75看看分离情况。 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2017-10-14 21:27:38
walking dead
金虫 (小有名气)
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高盐洗脱并不适宜所有蛋白的洗脱，有些会在高盐时变性或者沉淀，自然无法出峰。所以要选择适当的离子强度的洗脱液。 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
3楼2017-10-18 07:39:42
4楼2017-10-24 23:57:57
5楼2017-10-24 23:59:15
chaiyin1991
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6楼2018-03-05 15:41:16
7楼2018-03-09 13:57:53
hc-material
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8楼2018-04-23 11:03:11
送红花一朵 |
我并不是专门换缓冲液的，是在冲了1cv的缓冲液发现蛋白没出来，打算结束实验，用水洗柱子时突然有一个蛋白峰出来，接了样品跑了才发现是我的样品，所以是在很偶然的情况下发现我的蛋白出峰不正常，并不是专门换来换去。现在只是想对这种情况作出解释才来请教一下大家 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2018-04-24 16:50:55
10楼2018-04-24 16:54:18