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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » superdex75纯化蛋白 低盐反而出峰，高盐不出峰
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教洋文

新虫 (初入文坛)

[交流] superdex75纯化蛋白 低盐反而出峰，高盐不出峰 已有7人参与

大家好，请教一个问题，我在纯化抗体片段，约50KD，杂蛋白120KD，用S75pg这个柱子。现在有一个很奇怪的现象，用20mM Tris+100mM Nacl pH7.42CV都不出峰，在1cv时已出盐峰。换水冲1CV后反而在电导下降时，即缓冲液约换成纯水时出了目的蛋白峰。理论上加了盐应该利于蛋白下来的，为什么现在反而是低盐蛋白下来了。大家对此现象有什么好解释吗？

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1楼 2017-10-14 16:13:37
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教洋文

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by hc-material at 2018-04-23 11:03:11
额，有谁告诉你小于填料的物质会在1cv时出来呢？？？？？？75PG的分离范围是3000-80000，你的目标50000，进入孔内。先出来盐，是平衡时体系的盐，不分离过程出的盐，搞不明白分子筛的为啥缓冲液换来换取，你用含氯化 ...

我并不是专门换缓冲液的，是在冲了1cv的缓冲液发现蛋白没出来，打算结束实验，用水洗柱子时突然有一个蛋白峰出来，接了样品跑了才发现是我的样品，所以是在很偶然的情况下发现我的蛋白出峰不正常，并不是专门换来换去。现在只是想对这种情况作出解释才来请教一下大家

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9楼2018-04-24 16:50:55
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minecat

木虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
盐溶盐析，可能对于你这个蛋白离子强度低一些更合适吧，可以把氯化钠去掉，再跑一次superdex75看看分离情况。

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教洋文
2楼2017-10-14 21:27:38
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
高盐洗脱并不适宜所有蛋白的洗脱，有些会在高盐时变性或者沉淀，自然无法出峰。所以要选择适当的离子强度的洗脱液。

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教洋文
3楼2017-10-18 07:39:42
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教洋文

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by minecat at 2017-10-14 21:27:38
盐溶盐析，可能对于你这个蛋白离子强度低一些更合适吧，可以把氯化钠去掉，再跑一次superdex75看看分离情况。

试了无nacl的缓冲液，只有20mM tirs，离子浓度很低了，还是不出峰，仍然在水冲时下来峰

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4楼2017-10-24 23:57:57
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