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教洋文

新虫 (初入文坛)

[交流] superdex75纯化蛋白 低盐反而出峰,高盐不出峰 已有7人参与

大家好,请教一个问题,我在纯化抗体片段,约50KD,杂蛋白120KD,用S75pg这个柱子。现在有一个很奇怪的现象,用20mM Tris+100mM Nacl pH7.42CV都不出峰,在1cv时已出盐峰。换水冲1CV后反而在电导下降时,即缓冲液约换成纯水时出了目的蛋白峰。理论上加了盐应该利于蛋白下来的,为什么现在反而是低盐蛋白下来了。大家对此现象有什么好解释吗?

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教洋文

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
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8楼: Originally posted by hc-material at 2018-04-23 11:03:11
额,有谁告诉你小于填料的物质会在1cv时出来呢??????75PG的分离范围是3000-80000,你的目标50000,进入孔内。先出来盐,是平衡时体系的盐,不分离过程出的盐,搞不明白分子筛的为啥缓冲液换来换取,你用含氯化 ...

我并不是专门换缓冲液的,是在冲了1cv的缓冲液发现蛋白没出来,打算结束实验,用水洗柱子时突然有一个蛋白峰出来,接了样品跑了才发现是我的样品,所以是在很偶然的情况下发现我的蛋白出峰不正常,并不是专门换来换去。现在只是想对这种情况作出解释才来请教一下大家

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9楼2018-04-24 16:50:55
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minecat

木虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
盐溶盐析,可能对于你这个蛋白离子强度低一些更合适吧,可以把氯化钠去掉,再跑一次superdex75看看分离情况。

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2楼2017-10-14 21:27:38
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
高盐洗脱并不适宜所有蛋白的洗脱,有些会在高盐时变性或者沉淀,自然无法出峰。所以要选择适当的离子强度的洗脱液。

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3楼2017-10-18 07:39:42
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教洋文

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by minecat at 2017-10-14 21:27:38
盐溶盐析,可能对于你这个蛋白离子强度低一些更合适吧,可以把氯化钠去掉,再跑一次superdex75看看分离情况。

试了无nacl的缓冲液,只有20mM tirs,离子浓度很低了,还是不出峰,仍然在水冲时下来峰

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4楼2017-10-24 23:57:57
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