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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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教洋文

新虫 (初入文坛)

[交流] superdex75纯化蛋白 低盐反而出峰,高盐不出峰 已有7人参与

大家好,请教一个问题,我在纯化抗体片段,约50KD,杂蛋白120KD,用S75pg这个柱子。现在有一个很奇怪的现象,用20mM Tris+100mM Nacl pH7.42CV都不出峰,在1cv时已出盐峰。换水冲1CV后反而在电导下降时,即缓冲液约换成纯水时出了目的蛋白峰。理论上加了盐应该利于蛋白下来的,为什么现在反而是低盐蛋白下来了。大家对此现象有什么好解释吗?

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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
高盐洗脱并不适宜所有蛋白的洗脱,有些会在高盐时变性或者沉淀,自然无法出峰。所以要选择适当的离子强度的洗脱液。

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3楼2017-10-18 07:39:42
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minecat

木虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
盐溶盐析,可能对于你这个蛋白离子强度低一些更合适吧,可以把氯化钠去掉,再跑一次superdex75看看分离情况。

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2楼2017-10-14 21:27:38
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教洋文

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:
2楼: Originally posted by minecat at 2017-10-14 21:27:38
盐溶盐析,可能对于你这个蛋白离子强度低一些更合适吧,可以把氯化钠去掉,再跑一次superdex75看看分离情况。

试了无nacl的缓冲液,只有20mM tirs,离子浓度很低了,还是不出峰,仍然在水冲时下来峰

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4楼2017-10-24 23:57:57
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教洋文

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by walking dead at 2017-10-18 07:39:42
高盐洗脱并不适宜所有蛋白的洗脱,有些会在高盐时变性或者沉淀,自然无法出峰。所以要选择适当的离子强度的洗脱液。

如果100mMnacl算高盐的话,那相当于我的蛋白沉淀了,如果我的蛋白沉淀,不是应该立马从柱子上出来吗?

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5楼2017-10-24 23:59:15
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