24小时热门版块排行榜    

查看: 3520  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

教洋文

新虫 (初入文坛)

[交流] superdex75纯化蛋白 低盐反而出峰,高盐不出峰 已有7人参与

大家好,请教一个问题,我在纯化抗体片段,约50KD,杂蛋白120KD,用S75pg这个柱子。现在有一个很奇怪的现象,用20mM Tris+100mM Nacl pH7.42CV都不出峰,在1cv时已出盐峰。换水冲1CV后反而在电导下降时,即缓冲液约换成纯水时出了目的蛋白峰。理论上加了盐应该利于蛋白下来的,为什么现在反而是低盐蛋白下来了。大家对此现象有什么好解释吗?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
额,有谁告诉你小于填料的物质会在1cv时出来呢??????75PG的分离范围是3000-80000,你的目标50000,进入孔内。先出来盐,是平衡时体系的盐,不分离过程出的盐,搞不明白分子筛的为啥缓冲液换来换取,你用含氯化钠的缓冲液在走几个CV,自然就出来。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

8楼2018-04-23 11:03:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

minecat

木虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
盐溶盐析,可能对于你这个蛋白离子强度低一些更合适吧,可以把氯化钠去掉,再跑一次superdex75看看分离情况。

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-10-14 21:27:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
高盐洗脱并不适宜所有蛋白的洗脱,有些会在高盐时变性或者沉淀,自然无法出峰。所以要选择适当的离子强度的洗脱液。

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2017-10-18 07:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

教洋文

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by minecat at 2017-10-14 21:27:38
盐溶盐析,可能对于你这个蛋白离子强度低一些更合适吧,可以把氯化钠去掉,再跑一次superdex75看看分离情况。

试了无nacl的缓冲液,只有20mM tirs,离子浓度很低了,还是不出峰,仍然在水冲时下来峰

发自小木虫IOS客户端
4楼2017-10-24 23:57:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 两块石头 +7 阿美_Lml888 2026-09-03 10/500 2026-09-06 20:08 by 阿美_Lml888
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 19:21 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:41 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:21 by eObJPa4gWmp6
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 18:09 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:09 by eObJPa4gWmp6
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 17:21 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 17:09 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才!!! +5 SCSIOyxguo 2026-09-03 8/400 2026-09-06 15:06 by 可爱小花朵
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:29 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:20 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:09 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 7ZYIEW2YWn72 2026-09-04 9/450 2026-09-06 06:00 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中,邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[文学芳草园] 初秋的晨风 +4 阿美_Lml888 2026-09-04 6/300 2026-09-05 13:51 by 阿美_Lml888
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
请填处理意见