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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » superdex75纯化蛋白 低盐反而出峰，高盐不出峰
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教洋文

新虫 (初入文坛)

[交流] superdex75纯化蛋白 低盐反而出峰，高盐不出峰 已有7人参与

大家好，请教一个问题，我在纯化抗体片段，约50KD，杂蛋白120KD，用S75pg这个柱子。现在有一个很奇怪的现象，用20mM Tris+100mM Nacl pH7.42CV都不出峰，在1cv时已出盐峰。换水冲1CV后反而在电导下降时，即缓冲液约换成纯水时出了目的蛋白峰。理论上加了盐应该利于蛋白下来的，为什么现在反而是低盐蛋白下来了。大家对此现象有什么好解释吗？

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1楼 2017-10-14 16:13:37
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sungel520

新虫 (初入文坛)
★
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chaiyin1991正解。另外，你用水冲蛋白可能直接被冲出来了或者凝集堵柱子的可能性很大。
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教洋文
7楼2018-03-09 13:57:53
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minecat

木虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
盐溶盐析，可能对于你这个蛋白离子强度低一些更合适吧，可以把氯化钠去掉，再跑一次superdex75看看分离情况。

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教洋文
2楼2017-10-14 21:27:38
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
高盐洗脱并不适宜所有蛋白的洗脱，有些会在高盐时变性或者沉淀，自然无法出峰。所以要选择适当的离子强度的洗脱液。

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教洋文
3楼2017-10-18 07:39:42
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教洋文

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by minecat at 2017-10-14 21:27:38
盐溶盐析，可能对于你这个蛋白离子强度低一些更合适吧，可以把氯化钠去掉，再跑一次superdex75看看分离情况。

试了无nacl的缓冲液，只有20mM tirs，离子浓度很低了，还是不出峰，仍然在水冲时下来峰

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4楼2017-10-24 23:57:57
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