应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 以提取的基因组为模板，使用PrimerSTAR酶对目的基因进行PCR无果，求助各位大神
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
161/2返回列表12下一页
查看: 2715  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

长大的小鱼93

新虫 (小有名气)

[求助] 以提取的基因组为模板，使用PrimerSTAR酶对目的基因进行PCR无果，求助各位大神 已有4人参与

筛选到一株含有目的酶的菌株，使用NCBI查找到目的酶的基因，以提取的基因组为模板，使用PrimerSTAR酶对目的基因进行PCR均未果。期间重新设计过引物，进行过梯度PCR但都没有结果，且每次跑胶结果都特别干净，没有任何条带。实验新手一枚，现在请问各位大神有没有遇到过这种情况？是不是可以用Taq酶进行一下PCR，但我是要PCR获得目的基因送测序，怕Taq酶保真性不高有突变。希望大家可以给出一些建议，一些我可以继续的尝试，谢谢大家了!
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-10-09 20:24:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom
基因组用纯水稀释10或100倍试试，基因组中残留酚氯仿影响pcr

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

长大的小鱼93 长大的小鱼93
只要有梦想，坚持就一定能实现
2楼2017-10-09 21:09:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-10-11 07:44:35
primerstar扩增不出来，是因为它具有将你的引物或者模板讲解的 可能性，而普通的Taq酶没有， 所以Taq酶能扩出来的，primerstar不一定能扩出来,而热启动Taq聚合酶扩增性能很好，不会出现primerstar的 情况而且大于普通酶的 灵敏度和特异性，值得 一试。如果扩增片段大于15kb的话，推荐长扩增聚合酶，下游实验对精确度要求很高的话，建议使用 具有 保真性的高保真酶。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

长大的小鱼93
及时行乐，人生不留遗憾！
3楼2017-10-09 21:17:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

长大的小鱼93

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by flhua at 2017-10-09 21:09:06
基因组用纯水稀释10或100倍试试，基因组中残留酚氯仿影响pcr

好的，谢谢建议，明天试试
赞一下 回复此楼
4楼2017-10-09 21:52:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

长大的小鱼93

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-10-09 21:17:05
primerstar扩增不出来，是因为它具有将你的引物或者模板讲解的 可能性，而普通的Taq酶没有， 所以Taq酶能扩出来的，primerstar不一定能扩出来,而热启动Taq聚合酶扩增性能很好，不会出现primerstar的 情况而且大于普 ...

谢谢，请问primerstar可以将引物或是模板降解还是第一次听说，可以具体解释一下吗，万分感谢；会试一试用taq酶进行PCR，日后有问题还请多多指教，谢谢！
赞一下 回复此楼
5楼2017-10-09 21:57:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先用taq酶扩增试试，primerStar对模板要求比较高……

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
不是优秀，而是不可替代
6楼2017-10-09 22:54:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

egexig

新虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2017-10-11 07:44:51
我也有一段目的基因，用基因组作为模板怎么都行不通，换了好多引物都不行。相同基因其他位点都p出来了。
楼主最后解决了没？
赞一下 回复此楼
7楼2017-10-10 10:04:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydog52

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by flhua at 2017-10-09 21:09:06
基因组用纯水稀释10或100倍试试，基因组中残留酚氯仿影响pcr

这问题我也遇到过，稀释之后确实扩出来了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
自信源于一次次成功的积累
8楼2017-10-10 12:06:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

长大的小鱼93

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by egexig at 2017-10-10 10:04:04
我也有一段目的基因，用基因组作为模板怎么都行不通，换了好多引物都不行。相同基因其他位点都p出来了。
楼主最后解决了没？

还没解决呢，现在正在一点点尝试，咨询大家的建议
赞一下 回复此楼
9楼2017-10-10 14:24:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flhua

木虫 (正式写手)

bachelordom
是不是基因组上没有你要的基因，基因组有问题，基因片段短的话用菌液为模版都能P出来

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
只要有梦想，坚持就一定能实现
10楼2017-10-10 14:33:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 长大的小鱼93 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 26考研-291分-厦门大学（085601）-柔性电子学院材料工程专业求调剂 +5 min3 2026-03-24 6/300 2026-03-30 18:42 by 544594351
[考研] 0703化学求调剂 +6 丹青奶盖 2026-03-26 8/400 2026-03-30 18:33 by 探123
[考研] 328求调剂 +8 嗯滴的基本都 2026-03-27 8/400 2026-03-30 17:20 by Wang200018
[考研] 0703 化学 求调剂，一志愿山东大学 342 分 +7 Shern—- 2026-03-28 7/350 2026-03-30 16:31 by nothing投稿中
[考研] 303求调剂 +7 DLkz1314. 2026-03-30 7/350 2026-03-30 16:05 by shuang5186
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-27 8/400 2026-03-30 14:09 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +6 niko- 2026-03-27 6/300 2026-03-30 10:25 by herarysara
[考研] 0856求调剂 +8 楒桉 2026-03-28 8/400 2026-03-30 10:00 by wzy-lxz
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-29 20:21 by dophin1985
[考研] 299求调剂 +10 15188958825 2026-03-25 10/500 2026-03-29 17:51 by 王亮_大连医科大
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-29 5/250 2026-03-29 16:46 by 学员8dgXkO
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-03-26 6/300 2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +4 小张zxy张 2026-03-26 8/400 2026-03-28 19:25 by lbsjt
[考研] 317求调剂 +6 十闲wx 2026-03-24 6/300 2026-03-28 13:27 by Iveryant
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭